GE Healthcare-17-0891-01 細胞分離液/Percoll

上海恒渡生物科技有限公司

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價格：電議

所在地：上海

型號：GE Healthcare-17-0891-01

更新時間：2018-07-30

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公司地址：上海市奉賢區奉浦工業區奉浦大道111號5樓2336室

13052217467 張燕(女士) 經理

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產品簡介

公司主要經營：ELISA試劑盒，生化試劑，實驗耗材，細胞，血清，培養基，抗體等！代理經銷： Sigma、Amresco、invitrogen、Gibco、Hyclone、BD、Roche、GE、Merck、OXOID試劑血清及培養基；NUNC、corning、Axygen耗材；Abcam、santa cruz、CST、R&D抗體，細胞因子等產品；

公司簡介

上海恒渡生物科技有限公司，是一家專注于生命科學和生物技術領域的高科技企業，經營產品主要包括常規生化試劑、分子生物學試劑、免疫組化坑體及細胞因子、細胞培養基、科研儀器及實驗室常規耗材等生物技術服務。
公司一方面注意跟蹤世界范圍分子生物學、細胞生物學等生物學科的發展前沿，努力將歐美專業生產廠家的具有國際先進水平的產品推薦給各類研究人員；另一方面也非常重視自主產品研究和開發，推出了一系列具有競爭力的產品和服務。公司客戶遍布大學、研究所、醫院、衛生防疫、商品檢驗檢疫、制藥公司、生物技術公司和食品工業等單位。公司在重視產品質量的同時，也建立了一套集技術支持、物流、售后服務等多個部門的全方位的服務體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務提供給每一個客戶。

公司主營業務：
試劑盒：免疫組化試劑盒、ELISA試劑盒、分子生物學試劑盒。
細胞：原裝進口細胞、國產腫瘤細胞、國產正常細胞。
耗材：細胞培養耗材、普通實驗耗材。
抗體：免疫組化、免疫熒光、流式細胞檢測、免疫細胞化學。
生化試劑：原裝進口生化試劑、進口分裝生化試劑、國產生化試劑。

代理經銷：
Sigma、Amresco、Invitrogen、Gibco、Hyclone、Roche、Merck
Nunc、Corning、Axygen、abcam、santa cruz、細胞因子等產品；為廣大客戶帶來快捷和方便！

在科學技術飛速發展的今天，恒渡生物緊跟時代步伐，以優良的品質，合理的價格
全心的付出和不斷創新的精神為拼搏在科研一線的偉大工作者們提供全方位高品質的服務！

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產品說明

英文名：Percoll

品牌：GE Healthcare

存儲條件：低溫

級別：Biotechnology Grade

產地：美國

現貨Percoll;細胞分離液;Pharmacia 17-0891-01 詳詢說明書產品名稱：Percoll，細胞分離液
產品貨號：17-0891-01
產品規格：1L
保存溫度：2-8℃

Percoll不連續密度梯度沉淀法分離純化淋巴細胞和淋巴母細胞
（一）原理
Percoll是一種包有乙***的硅膠顆粒。滲透壓很低（<20mosm／kg H２O）, 粘度也很小，可形成高達1.3g／ml密度，采用預先形成的密度梯度時可在低離心力（200～1000g）于數分至數十分鐘內達到滿意的細胞分離結果。由于Percoll擴散常數低，所形成的梯度十分穩定。此外，Percoll不穿透生物膜，對細胞害，因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒，還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。
（二）操作方法及注意事項
1.不同濃度（密度）Percoll溶液的制備: 先用9份Percoll與1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓，然后用生理溶液（0.85％ NaCl或0.15M PBS）稀釋到所需濃度。
Percoll濃度（％） 70 60 50 40 30 20
比重g／ml 1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031
2.不連續密度梯度Percoll層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤，除去多余血清，這種預處理可使逐層疊加的Percoll液平穩沿管壁流下，使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時相鄰兩層Percoll比重相差不大時，可將Percoll液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。
3.裝樣：樣品體積和細胞濃度根據不同細胞而異，一般加樣體積不宜過大，細胞濃度也不可過高，否則會影響細胞的分離和回收。
4.離心：一般采用離心力為400g，時間20～25min。由于多層Percoll之間密度差別不大，因此離心機加速、降速時要慢，要平穩。
5.取樣：當所要分離的細胞大部分在兩層的界面時，可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細胞;有時大部分細胞位于Percoll層中,則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細胞經2次洗滌后可供培養或檢測用。
（三）分離純化細胞舉例
1.富含NK活性大顆粒淋巴細胞（LGL）的純化:按順序由下向上逐層加50％、47.5％、45％、42.5％和40％五種不同密度的Percoll,如用10ml試管（或塑料管）分離,每層Percoll約1.2～1.5ml，初步從外周血中分離的PBMC細胞1×10８懸于１ml培基中，按要求裝樣、離心和取樣。一般富含NK殺傷活性的LGL細胞位于42.5％與45％Percoll界面以及上下二層的Percoll液中。
2.純化淋巴母細胞和除去死細胞：分別疊加50％和30％Percoll液。收取經PHA（或其它抗原、有絲分裂原）刺激PBMC,或含有較高比例異型的PBMC（如腎綜合征出血熱患者），按要求裝樣、離心和取樣。位于管底的淋巴細胞為小淋巴細胞；兩層Percoll之間為淋巴母細胞，純度和回收率在80％以上，位于30％Percoll表面是死細胞。收獲淋巴母細胞可進行表型、結構以及功能的研究。
（四）人不同血細胞的漂浮密度表人不同血細胞的漂浮密度
細胞漂浮密度細胞漂浮密度
紅細胞1.09-1.11淋巴細胞1.052-1.077
粒細胞 B淋巴細胞1.062-1.075
嗜酸性1.09-1.095T淋巴細胞1.065-1.077
嗜中性 1.080-1.085淋巴母細胞1.065-1.077
單核細胞1.050-1.066自然殺傷細胞1.050-1.070
血小板1.030-1.060

（五）問與答
問：請問percoll連續梯度怎么配制？比如15%－－-75%的percoll連續梯度?
答：根據你需要的具體密度梯度決定的，根據要分離的不同細胞種類，數量等等，也有用原液配的。也有用80％配的，不一定的。另外，percoll本身是低滲透壓的，要用高滲透壓溶液配成生理等滲透壓溶液，然后使用，不然，細胞容易破裂。一般是先用9份Percoll與1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓，然后用生理溶液（0.85％ NaCl或0.15M PBS）稀釋到所需濃度。即取Percoll原液與10倍濃縮的PBS以9：1的比例混合，此時溶液為100％ Percoll，比重是1.127，毫克分子滲透壓濃度為290mOsmol/kg。
（六） Percoll優點
Percoll是經過聚乙*** （polyvinyl pyrolidone, PVP）處理的硅膠顆粒混懸液，對細胞性和刺激性。Percoll混懸液的硅膠顆粒大小不一，經過高速離心后，可形成一個連續密度梯度，將比重不同的細胞分離純化。
因為Percoll具有滲透性低、不穿透細胞、粘度低、密度高和害等優點，與目前常用的密度梯度離心介質，包括蔗糖（Sucrose）、血清白蛋白（Serum albumin, ALB）、聚蔗糖（Ficoll）、氯化銫（CsCl）等相比，是目前較理想的介質。Percoll密度梯度離心已被多次成功地用于動物細胞及其細胞器的分離，純化了包括人血液細胞、骨髓細胞、紅血球細胞、白血球細胞、淋巴細胞、肝細胞等在內的十余種動物細胞。這一技術也開始用于用于分離和純化植物原生質體、核、葉綠體和線粒體。

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