Cell Counting Kit-8
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目錄號
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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包裝
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CA1210-100
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Cell Counting Kit-8
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100 T
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1ml
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CA1210-500
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Cell Counting Kit-8
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500 T
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5ml
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CA1210-1000
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Cell Counting Kit-8
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1000 T
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10ml
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CA1210-3000
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Cell Counting Kit-8
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3000 T
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30ml
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保存：4℃密封避光保存，有效期一年。
產(chǎn)品簡介： Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8試劑盒，為MTT法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)
使用說明：
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測定細(xì)胞具體數(shù)量時）
1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。
2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個復(fù)孔。
3、接種后培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X 軸），OD 值為縱坐標(biāo)（Y 軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間。）
二、細(xì)胞活性檢測
1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在37℃,5% CO
2的條件下）。
2、向每孔加入10μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。
4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。
5、如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
三、細(xì)胞增值-毒性檢測
1、在96孔板中配置100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時（在37 ℃，5% CO2的條件下）。
2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如：6、12、24或48小時）。
3、向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。
4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。
5、用酶標(biāo)儀測定在450 nm處的吸光度。
6、如果暫時不測定OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
活力計(jì)算：.
細(xì)胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[ A(0加藥)－A(空白)]×100
A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度
A（0 加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
注意事項(xiàng)：
①建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。
②白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時間。
③當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時，貼壁細(xì)胞的zui小接種量至少為1 ,000個/孔 (100 μL培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 ( 100 μL培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10% 加入CCK-8溶液。
④如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片，但是450nm檢測靈敏度zui高。
⑤培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。
CCK-8法與其它檢測方法之間的比較：
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細(xì)胞計(jì)數(shù)方法
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MTT法
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XTT 法
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WST-1 法
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CCK-8法
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形成的formazan 的水溶性
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差
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好
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好
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好
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產(chǎn)品性狀
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粉末
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2 瓶溶液
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溶液
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1瓶溶液
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使用方法
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配成溶液后使用
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現(xiàn)配現(xiàn)用
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無需預(yù)制
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無需預(yù)制
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檢測靈敏度
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高
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很高
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很高
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高
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檢測時間
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較長
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較短
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較短
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短
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檢測波長
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560-600nm
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420-480nm
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420-480nm
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430-490nm
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細(xì)胞毒性
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高，細(xì)胞形態(tài)完全消失
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很低，細(xì)胞形態(tài)不變
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很低，細(xì)胞形態(tài)不變
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很低，細(xì)胞形態(tài)不變
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試劑穩(wěn)定性
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一般
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較差
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一般
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很好
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大批量樣品檢測
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可以
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非常適合
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非常適合
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非常適合
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便捷程度
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一般
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便捷
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便捷
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非常便捷
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