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價格：電議
所在地：上海
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更新時間：2017-07-17
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公司地址：上海市閔行區(qū)北橋鎮(zhèn)吳河路328號A棟2樓
易清風(女士)
Beacon 技術：該技術以美國人 Tagyi 為代表。也是加入了熒光探針，但它是 環(huán)狀的寡核苷酸探針，分別由莖部和環(huán)部組成， 兩端分別標記 熒光報告基團和熒光猝滅基團，在無靶序列的情況下，探針始終是環(huán)狀，報告基團的熒光被猝滅基團猝滅，使熒光檢測儀檢測不到熒光信號；而在有靶序列時，即在 PCR 的退火階段探針與靶序列結合，使熒光報告基團和猝滅基團分開，這樣熒光儀可以檢測到熒光，熒光信號的強弱代表了靶序列的多少。
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分子信標知識介紹
? FRET 技術：該技術以 Roche( 羅氏公司 ) 為代表。它的基本原理是：兩條直線型寡核苷酸探針，其中一條的 3 ‘端標記熒光激發(fā)基團，另一條的 5 ' 端標記熒光檢測基團，在無靶序列的情況下，兩條探針分開，無法進行能量的傳遞，這樣熒光儀不能檢測到熒光信號；而當有靶序列時，即在 PCR 的退火階段兩條探針與靶序列結合，使得兩條探針上的熒光基團可以進行能量的傳遞，這樣熒光儀就可以檢測到熒光信號，熒光信號的強弱代表了靶序列的多少。
實時熒光定量PCR中的幾個俗語
? Ct 值：是指每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環(huán)數。（如圖所示）
? 熒光域值（ threshold ）：是指 PCR 反應的前 15 個循環(huán)的熒光信號，熒光域值的缺省設置是 3-15 個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的 10 倍，即： threshold.
? Ct 值與起始模板的關系：研究表明，每個模板的 Ct 值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系〔 1 〕，起始拷貝數越多， Ct 值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代 Ct 值（如圖 2 所示）。因此，只要獲得未知樣品的 Ct 值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
熒光定量PCR應用廣泛
? 可以對各種基因的表達進行定量分析，如：同一基因在不同組織中的表達差異、同一基因在不同藥物處理后的表達差異、轉基因食品的檢測。過去常用的高通量篩選基因表達差異的技術是 cDNA 芯片和差異顯示，但這兩種技術的缺點是只能定性而非完整意義上的定量分析。實時 PCR 技術和高通道實時 PCR 儀的出現，無疑為這種檢測提供了大的方便。
? 可以進行點突變分析和等位基因分析，用不同的熒光報告基團標記 Taqman 探針，然后分別與野生型和突變型雜交，如果一種熒光信號明顯強于另一種熒光信號，則表明它是純合子；如果兩種熒光信號都明顯增強，則表明它是雜合子。另外分子信標（ Molecular Beacon）就是專門為這種技術設計的探針。
? 可以進行單核苷酸多態(tài)性的分析，檢測單核苷酸多態(tài)性對于研究個體對不同疾病的易感性或者個體對特定藥物的不同反應有著重要的意義，因分子信標結構的巧妙性，一旦 SNP 的序列信息是已知的，采用這種技術進行高通量的 SNP 檢測將會變得簡單而準確。
? 可以進行 DNA 甲基化檢測， DNA 甲基化同人類的許多疾病有關，特別是癌癥， Laird 報道了一種稱作 Methylight 的技術，在擴增之前先處理 DNA ，使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影響，用特異性的引物和 Taqman 探針來區(qū)分甲基化和非甲基化的 DNA ，這種方法不僅方便而且靈敏度更高。
? 對傳染性疾病進行定量定性分析，這在我國應用比較廣泛，大家比較熟悉。許多生產臨床PCR 試劑的廠商已經陸續(xù)推出了一系列的診斷試劑，如：肝炎系列、性病系列、腫瘤系列等等。
熒光定量PCR技術服務 
(含lncRNA熒光定量PCR-環(huán)狀RNA熒光定量PCR)
熒光定量PCR用Taqman方法對DNA/RNA進行real time PCR的定量測定或型的鑒定。
熒光定量PCR服務要求
1. 請您提供新鮮的且盡量多的材料(各種材料的RNA提取量請參照“總RNA 的提取”），或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/ 樣品）；（各種材料的DNA提取量請參照“ DNA的提取”），或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/ 樣品)。
2. 請通過E-mail提供已知的全長基因序列。
3. 請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/ RNA來源、豐度等
熒光定量PCR操作程序 
1. 根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。
2. 提取DNA/RNA 。
3. Real Time PCR(熒光定量PCR)，進行實驗結果分析
4. 實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料
熒光定量PCR收費標準
1、RNA提取：10－20個樣品的RNA提取是：150元/個；20－30個樣品的RNA提取是：120 元/個；30個以上樣品的RNA提取是：100元/個；每份材料少應提供：100mg/樣品
2、一個指標每個樣品為150元；二個指標每個樣品為240元；三指標每個樣品為300元，三個指標以上每個樣品為80元/反應。
3、引物合成為每個堿基2.1元，探針標記為1200元/條，如果是用sybr green I(染料)做，則免去探針的費用，染料贈送。
4、內參的GAPDH引物探針，標準曲線贈送。
5、不再收取任何的基礎費或者開機費。
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