【產品操作】

【產品】

1.可再生的單個細胞的結果(或< 15 pg DNA)

2.優越的再現性等位基因的表示

3.（RB3050/R30050） PicoPLEX® WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒易于使用和自動化

4.（RB3050/R30050） PicoPLEX® WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒在所有分辨率、微陣列和PCR上都有明確的結果

【產品應用】

研究領域

PicoPLEX® WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒的適用范圍十分廣泛，多種原始材料和微量樣品均可通過該試劑盒進行單細胞全基因組擴增，

•生物標志物研究（CNVs、SNVs）

•體外受精胚胎植入前基因測序

•轉基因動物基因分型

•胚胎和干細胞研究

•單精子分型 腫瘤

•體細胞遺傳變異分析

•腫瘤進化和發展

•腫瘤干細胞

•循環腫瘤細胞 細菌

•宏基因組學研究

•微生物基因分型

Rubicon Genomics （RB3050/R30050） PicoPLEX® WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒可實現高度均一的全基因組擴增，其核心技術為多次退火環狀循環擴增（MALBAC）技術，該技術利用獨特的具有鏈置換活性的DNA聚合酶進行準線性的全基因組預擴增，通過PCR進行指數式擴增，為下游分析提供充分的實驗材料。

Rubicon Genomics （RB3050/R30050） PicoPLEX® WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒解決了單細胞全基因組擴增的其中幾個必要的矛盾：

1. 線性擴增。如果用全基因組PCR擴增，因為PCR的擴增偏向性，再加上PCR過程中較小的偏向性通過指數放大，其結果就會是嚴重的覆蓋不均一，導致在許多地方只有很低的覆蓋、甚至沒有覆蓋。所以，保證模板被線性地擴增，是要問題。

2. 全基因組覆蓋。常規的建庫方法，因為補平、加A、接頭連接效率的問題，起始DNA中有很大一部分會被浪費，沒有形成有效文庫分子（也就是兩頭都接好引物的DNA片段）。在單細胞測序中，這是不可接受的。

3. 高擴增效率。單細胞中的每個基因位置理論上都只有2個拷貝，而要從2個拷貝擴增到足夠建立文庫的DNA量，要經過許多次的擴增。這就需要很高的擴增效率。而一般的線性擴增很難有好的擴增效率

我們的 PicoPLEX® WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒與MALBAC其技術原理一樣，

MALBAC™技術（Multiple Annealing and Looping based Amplification Cycles），即多次退火環狀循環擴增技術，為一種單細胞全基因組擴增技術，先利用獨特的具有鏈置換活性的DNA聚合酶進行準線性的全基因組預擴增，再通過PCR技術進行指數式擴增，為下游分析提供充足的實驗材料。

MALBAC™技術源于哈佛大學，其授權給億康基因，是目前上的單細胞全基因組擴增技術，使用該技術的相關論文發表于科學期刊《Cell》、《Science》、《PNAS》等。使用該技術，科學家們完成了迄今覆蓋度zui高的單精子基因圖譜，次對人類單個卵細胞完成了測序。Science雜志評選單細胞測序技術為2013年具發展前景的六大科學項目之一，Nature Methods也將其選為Method of the Year 2013。

MALBAC技術：

1) MALBAC技術降低PCR擴增偏倚，使得單細胞中zui大90%以上的基因組能夠被測序。

2) MALBAC技術使得檢測單細胞中較小的DNA序列變異變得更容易，因此能夠發現個別細胞之間的遺傳差異。這樣的差異可以幫助解釋癌癥惡化的機制，生殖細胞形成機制，甚至是個別神經元的差異機制。

3) 靈敏度高：單細胞、單染色體或0.5pg的基因組DNA即可進行擴增。

4) MALBAC技術擴增均勻性顯著優于其它同類技術，低覆蓋度測序數據即可進行CNV分析，用于染色體三體檢測及染色體微缺失變異檢測。

5) 擴增產物用途廣泛：可用于二代測序、微陣列、qPCR、基因克隆等下游應用。

MALBAC™學術突破性進展：

1.在雜志發表文章：Science 、Cell 、PNAS、Annual Review等

2.嚴格驗證MALBAC技術用于PGS的文章發表于ASRM（美國生殖醫學學會）會刊

3.次完成人類單個卵細胞的測序

4.完成迄今覆蓋度zui高的單精子基因圖譜

5.個無創植入前染色體篩查寶寶誕生，相關成果發表于《PNAS》

A. 用5’端有27個統一序列，而3’端是8個隨機序列的引物，作為擴增引物。用隨機引物保證可以在模板鏈上的各處隨機結合

B. 0℃淬火，再65℃等溫擴增，得到一輪的復制的產物 a. n個擴增產物（在圖中標成藍色），這些擴增產物都有在5’端有一個統一的引物 b. 1個原來的模板（在圖中標成黑色）

C. 用有前鏈移開功能的聚合酶（?29聚合酶）來進行擴增，這種酶的特點是會把酶前行方向上的前鏈從原來的模板鏈上進行解鏈、移開。利用這種特點，可以讓模板上的每個點在一輪反應中，都有機會得到n個拷貝

D.巧妙之處：

a. 0℃淬火，在延伸開始之前，就把n個引物雜交到模板上

b. ?29聚合酶可以把前面的鏈給推開，結合前面的淬火步驟，一次復制出n個擴增子 2. 第2輪起的m輪擴增

巧妙之處

a. 線性擴增

i. 其巧妙之處在于，每個循環的后，加了一步58℃退火。這一退火過程，讓完整擴增產物的兩端發生鏈內雜交。這樣3’端的序列就不能與新的游離引物發生雜交，也就不會引發起始于3’端的擴增，也就是避免了“完整擴增產物”的自我指數擴增。

ii. 如果發生以8個隨機堿基為引物3’末端的指數擴增，3’末端的堿基序列不一致性就會導致擴增效率的Bias，再經過指數放大，就會變成明顯的擴增效率Bias。

iii. 現在，還是8個隨機堿基的引物在模板上隨機地找結合位點，所有位點的被擴增機會大致均等。

iv. 完整產物的數量是m * n2，也就是說，擴增產物與m成正比，而不是與m2成正比，更不是與2m成正比。也就是說擴增產物與擴增的次數成線性關系。這達成了單細胞測序所要求的：線性擴增。

b. 全基因組覆蓋

i. 再次利用?29聚合酶的前鏈移開功能，在一個模板上擴增出多個擴增子。這樣從第1輪擴增開始，每個模板就會得到多個擴增子。再加上以后5輪的擴增中，原始模板都有機會再次被擴增出多個擴增子。這樣本保證每個原始模板都產生n個擴增子。建庫時被漏掉一些擴增子，還是能保證大多數的基因組區域可以被建成庫

c. 高擴增效率

i. 在單細胞全基因擴增中，所得到的 “完整擴增產物”的個數是m * n2個。這個 “n2”，還是利用了?29聚合酶的“前鏈移開功能“，保證了擴增有較高的效率。可以得到較多的擴增產物，以供下面的實驗之用。

Rubicon Genomics （RB3050/R30050） PicoPLEX® WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒其原理：

PicoPLEX® WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒通過擴增產物的末端自封閉來抑制指數擴增。 ·

PicoPLEX® WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒通過數輪線性擴增得到大量的擴增產物

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【研究領域】

1. 外顯子組富集

2. SureSelect® 富集

3. SeqCap® EZ 富集

4. 福爾馬林固定石蠟包埋DNA測序

5. 胚胎植入前遺傳學篩查(PGS）/種植前遺傳學診斷（PGD）

6. DNA測序

7. RNA測序

8. 染色體免疫共沉淀測序

【產品詳情】

企業使命：我們的使命是用干細胞科學家和組織工程技術人員在再生醫學工程技術領域的創新力量，實現人類組織器官的定制、再生、功能重建，終提升人類的健康生活品質。

企業理念：專注組織器官再生與功能重建Focus on Tissue and Organ Regeneration

營銷公司簡介：

華雅再生醫學旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司是專門負責營銷的公司。

提供產品：華雅再生醫學旗艦公司-紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司為再生醫學和生物工程技術領域的組織器官再生研究、組織器官功能重建研究、干細胞技術研究、組織工程生物支架材料研究、器官移植醫療器械產品等再生醫學產業鏈的相關客戶提供：胚胎干細胞的種子細胞、心肌細胞、人源肝臟細胞、MSC間充質干細胞、基底膜基質膠細胞支架、干細胞生長分化調控因子、功能膠原蛋白生物材料、器官模型3D打印技術材料、神經干細胞培養基、STEM121抗體、BD科研P100、P800蛋白質組學采血管、BD PAXgene全血RNA樣本收集管、BD公司CPT/PRP美容采血管、Streck Cell-Free DNA BCT游離DNA采血管、循環腫瘤細胞CTC及無創產前基因檢測采血管、生物醫學試劑耗材儀器等種類豐富的產品，以“Focus on Tissue and Organ Regeneration專注組織器官再生與功能重建”為己任，我們與客戶攜手為再生醫學產業的發展而前行。

歡迎您致電 華雅再生醫學旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司 號：。華雅再生醫學-客服

2017年1月，Rubicon Genomics，Inc.成為Takara Bio的一員，現在寶日醫生物技術（北京）有限公司（Takara Bio北京分公司）開始在銷售Rubicon公司開發的下一代測序試劑。Rubicon公司成立于2000年，公司總部位于美國密歇根州。Rubicon公司開發的產品主要基于“ThruPLEX®技術”和“PicoPLEX®技術”，可以微量DNA起始構建下一代測序文庫。ThruPLEX®技術”可從血漿中的微量游離DNA構建高多樣性文庫，準確檢測低豐度DNA變異，用途廣泛。“PicoPLEX®技術”，可從單細胞等微量DNA起始構建高重復再現性文庫，用于拷貝數變異分析和染色體異倍性分析。Rubicon產品豐富了Takara基于SMART®的下一代測序產品線，為科研工作者在基因組學、單細胞和臨床應用研究等領域提供更多解決方案。代表產品之一為：Rubicon Genomics RB3050/R30050 PicoPLEX® WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒Whole Genome Amplification from Single Cells。

2016年年底，TAKARA寶日醫生物技術（北京）有限公司的市場部部長與寶生物工程（大連）有限公司的銷售部部長分別從北京和大連飛往上海，對華雅再生醫學的旗艦營銷公司：紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司進行了實地考察，雙方深入地探討了未來干細胞及再生醫學市場發展的趨勢和方向，在雙方公司中長期發展戰略上，志同道合地看好再生醫學市場的發展前景，歷史性的醫療革命是我們這代人肩負的偉大使命！

TAKARA公司日本總部是：“iPS干細胞之父”諾貝爾獎獲得者的故鄉，具有前沿的iPS干細胞技術實力，TAKARA公司旗下的Cellartis子公司，擁有超過40人的研發團隊，擁有超過15年的人干細胞研究經驗，建立并儲存大量的人iPS和ES細胞系。TAKARA旗下的Stem Cells公司SC Proven系列：憑借20多年干細胞技術經驗研發，包括干細胞研究用培養基、抗體等耗材，具有龐大的客戶群(美國、歐洲、日本)。

2017年TAKARA寶生物日本總部又收購了：美國Rubicon Genomics單細胞測序文庫構建的領導品牌，代表性產品之一為：Rubicon Genomics RB3050/R30050 PicoPLEX® WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒Whole Genome Amplification from Single Cells，ThruPLEX® Plasma-seq Kit，ThruPLEX® DNA-seq Kit，PicoPLEX® DNA-seq Kit，PicoPLEX® WGA Kit， TransPLEX® C-WTA Kit.

其中部分產品紅榮微再常備現貨，歡迎來電咨詢。

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