pcr儀溫度校準裝置、基因擴增儀(PCR儀)測溫系統校準系統
基因擴增儀(PCR儀)測溫系統校準規范
一、 引言
PCR是聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction)的簡稱，是在短時間內體外大量擴增特定的DNA片段的分子生物學技術。自動完成聚合酶鏈反應，提供DNA 擴增的溫度條件而設計的儀器稱為PCR儀。
PCR儀主要用于DNA片段的放大，可將DNA分子或某一DNA片段于數小時內擴增至十萬乃至百萬倍，在這過程中主要是3個特征溫度循環：
1． 高溫變性：把樣品加熱至90～95℃讓DNA模板變性變成單鏈。
2． 低溫退火：讓樣品的溫度迅速下降至50～65℃,引物就可以結合到模板上去。
3． 適溫延伸：讓樣品的溫度上升至70～75℃,DNA聚合酶就可以從引物開始用底物復制出新鏈。
因此，在PCR反應過程中對溫度控制的要求很高，良好的溫度控制是PCR儀質量好壞的關鍵。
二、PCR基因擴增儀校準的現狀
PCR儀的控溫精度、升降溫速率以及溫場的均勻性等直接影響DNA片段擴增的結果。PCR儀經使用后，其溫度傳感器的計量特性會發生變化，作為計量設備一般須經定期校準后方能繼續使用。
幾乎進行聚合酶鏈反應試驗的實驗室（如基因判別、親子鑒定、DNA個體識別）都會使用多臺擴增儀以滿足實驗需求。而且，實驗室內的基因擴增儀都是常開常用，使用頻率高，很難保證其性能指標符合實驗要求。各實驗室對PCR儀的質量控制還停留在自檢自校和依賴于廠商的售后支持。
三、 PCR儀溫度校準的項目及必要性
一個穩定的溫度循環是成功實現PCR所必需的。其中溫度控制的動、穩態特性是影響PCR擴增結果正確與否的最重要因素之一, 這包括溫度準確性、升降溫速度、溫場均勻性、最大超調溫度。
（一）、溫度準確性
溫度準確性是PCR儀最重要的性能指標，如溫度準確性低可直接造成非特異性擴增，甚至是錯誤的擴增結果，造成假陽性和假陰性。
市場上各家廠商考核基因擴增儀（PCR儀）性能的主要指標，一般廠家的企業指標為±0.5℃，一些性能較好的產品可以實現的溫度準確度為±0.3℃。故需對PCR儀控溫準確度進行測試。
校準實驗平均溫度的計算公式為：I—參加檢測的溫度探頭序號；n—參加檢測的溫度探頭的數量
（二）、溫場均勻性
由于PCR儀加熱器加熱不均勻，導致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗結果偏差。一般PCR儀邊緣點的溫度低于中間區域，所以均勻性為PCR儀重要的性能指標。一般廠家的企業指標規定均勻性為±0.5℃，一些性能較好的產品可以實現的溫度均勻度為±0.3℃。
校準實驗時，通過選取孔板中16個特殊反應位置來測量溫度，并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個探頭在同一時刻最大溫度與最小溫度的差值。均勻度計算公式為：tmax-tmin （tmax =最大溫度；tmin =最小溫度）
（三）、升降溫速率
PCR擴增產物數量的多少決定了PCR的效率。為了在短時間內獲得盡可能多的產物，需要儀器在升降溫段具有按照預設升降溫速率快速升溫和降溫的能力（最大升溫速率達15~20℃）。一個完整的PCR過程，是由若干個升溫→恒溫→降溫循環構成的。因為“變性”，“退火”和“延伸”3個階段是必須要保證的。因此，只有使升降溫的過程盡可能地迅速，才能縮短每個PCR循環以及整個PCR 過程所需時間。一般廠家的企業指標規定升溫速率為±3℃/sec。
儀器校準實驗時，升溫速率為溫度從40℃到90℃的時間；降溫速率為溫度從70℃到35℃的時間。
（四）、最大超調溫度
當溫度從一定點溫度調節到另一定點溫度,就會產生溫度的超調。超調溫度過大同樣會對試驗產生影響，所以校準實驗時，需要計算最大超調溫度和平均超調溫度。
四、解決方案
根據基因擴增儀(PCR儀)測溫系統校準規范的要求，我們公司推出了pcr儀溫度校準裝置、基因擴增儀(PCR儀)測溫系統校準裝置來校準pcr儀。
具體方案 精密測溫儀+恒溫槽+標準熱敏電阻
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