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價格:電議
所在地:上海
型號:T-subset
更新時間:2018-11-08
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公司地址:上海市閔行區(qū)光華路2118號
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李經(jīng)理(先生) 經(jīng)理
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試劑盒內(nèi)容: |
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T細(xì)胞亞群SAP法檢測試劑盒 標(biāo)本染色: |
1. 充分干燥(室溫2小時以上或過夜)的細(xì)胞涂片先用記號筆在標(biāo)本外畫圈,然后滴加固定液50μl,室溫靜置2-3分鐘,用PBS淋洗,擦干玻片背面及細(xì)胞外的PBS。 *以下反應(yīng)均需在濕盒中進(jìn)行。 2. 分別滴加抗人CD3、CD4、CD8單抗適量(10-30μl), 4℃過夜,PBS淋洗3次。 3. 滴加生物素標(biāo)記抗小鼠IgG適量(10-30μl),37℃孵育30-45分鐘,PBS淋洗3次。 4. 滴加堿性磷酸酶標(biāo)記鏈霉卵白素適量(10-30μl)37℃孵育30-45分鐘,PBS淋洗3次。 5. 滴加顯色劑30-50μl,室溫顯色20-40分鐘。可在顯微鏡下觀察,待細(xì)胞膜上出現(xiàn)紅色標(biāo)記物時,用PBS淋洗。 6. 滴加細(xì)胞核復(fù)染液30-50μl,30秒后自來水淋洗。 7. 滴加封片劑,蓋片封片,鏡檢。如不需保存亦可用水替代封片劑蓋片鏡檢。 |
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| 標(biāo)本制備: | 取肝素抗凝(25μl/ml)的靜脈血1~2ml,PBS稀釋1-2倍后,沿裝有等量淋巴細(xì)胞分離液的試管壁混勻緩慢加至液面上層,保持兩種液體界面清晰,離心(2000轉(zhuǎn)/分)15-20分鐘,吸取兩液面交界處的單個核細(xì)胞層,加5倍PBS,離心(1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,棄上清液,沉淀即為單個核細(xì)胞。利用試管中剩余的少許回流液體(約一滴)混勻細(xì)胞,制成單個核細(xì)胞懸液。滴30μl細(xì)胞懸液于載玻片上,靜置2分鐘使細(xì)胞下沉粘附于玻片上,吸去液體,快速吹干或37℃溫箱1小時烤干。或用PBS將單個核細(xì)胞調(diào)至2×105個/ml,離心涂片機(jī)1000轉(zhuǎn)離心1-2分鐘制片,快速吹干或37℃溫箱1小時烤干。涂片前取防脫片劑5-10μl均勻推片,亦可用棉簽粘取防脫片劑均勻涂于干凈玻片上,待干后制備細(xì)胞涂片,以防掉片。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 觀 察: | 高倍鏡下選取染色好的視野記數(shù)100-200個單個核細(xì)胞,細(xì)胞表面有紅色標(biāo)記物為陽性細(xì)胞。算出陽性率。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 正常參考值: | 正常人外周血中,陽性細(xì)胞百分率一般在:CD3,60-80%;CD4,35-55%;CD8,20-30%;CD4/CD8的比值在1.5-2.0范圍內(nèi)。 |
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