需要轉化生長因子β3檢測詳細說明書請與客服聯系！

泉州睿信生物核心專長：

生物藥物分析方法開發

分析方法驗證

RIP技術（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA 結合蛋白免疫沉淀），是研究細胞內RNA與蛋白結合情況的技術。分析與目的蛋白結合的 RNA.運用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白復合物沉淀下來，然后經過分離純化就可以對結合在復合物上的 RNA 進行分析；即用抗體或表位標記物捕獲細胞核內或細胞質中內源性的RNA結合蛋白，防止非特異性的 RNA的結合，免疫沉淀把RNA結合蛋白及其結合的RNA一起分離出來，結合的 RNA 序列可通過 microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR 或 高通量測序（RIP-Seq）方法來鑒定。是了解轉錄后調控網絡動態過程的有力工具，能幫助我們發現 miRNA 的調節靶點。

RIP 實驗流程

（一）. 細胞裂解液獲取

A. 單層細胞或者貼壁細胞處理

1.冷 PBS 清洗培養皿或培養瓶中的細胞兩次

2.加入冷 PBS 后用細胞刮將細胞刮下來，收集至 enpendoff管

3.1500rpm，4℃離心 5min，棄上清，收集細胞

4.用與細胞等體積的RIP裂解液重懸細胞，吹打均勻后于冰上靜置5min

5.每管分裝200ul細胞裂解液，貯存于-80℃

B.懸浮細胞處理：先收集細胞再計數，然后清洗裂解

C.組織樣品處理

1.冷 PBS 清洗新鮮切下的組織三次

2.加入冷 PBS 后，用勻漿器或其他細胞分離設備使組織分散為單個細胞，計數

3.1500rpm，4℃離心5min棄上清，收集細胞

4用與細胞等體積的 RIP 裂解液重懸細胞，吹打均勻后置于冰上靜置5min

5. 每管分裝 200ul 細胞裂解液，貯存于-80℃

（二）. 磁珠的準備

A.實驗前準備

1、enpendoff 管

2、磁力架

3、冰盒， RIP Wash Buffer 置于冰上

4、抗體，置于冰上

5、渦旋震蕩器

6、槍、槍頭放于超凈臺照射30min，槍噴DEPC水

B. 磁珠準備過程

1. 重懸磁珠

2. 標記實驗所需的enpendoff管，樣品包括目的樣品，陰性對照與陽性對照

3. 吸取 50ul 重懸后的磁珠懸液于每個 enpendoff 管

4. 每管加入 500ul RIP Wash Buffer，渦旋震蕩

5.將 enpendoff 管置于磁力架上，并左右轉動 15°使磁珠吸附成一條直線，去上清，重復一 次

6.用 100ul 的 RIP Wash Buffer 重懸磁珠，加入約 5ug 相應抗體于每個樣品中

7. 室溫孵育 30min

8. 將 enpendoff 管置于磁力架上，棄上清

9. 加入 500ul RIP Wash Buffer，渦旋震蕩后棄上清，重復一次

10. 加入 500ul RIP Wash Buffer，渦旋震蕩后置于冰上

（三）. RNA 結合蛋白免疫沉淀

A. 準備工作

1、冰盒

2、360°旋轉儀

3、RIP Wash Buffer 、0.5M EDTA 、RNase Inhibitor 置于冰上 B. RNA 結合蛋白免疫沉淀實驗過程

1.準備 RIP Immunoprecipitation Buffer

2.將前上步的 enpendoff 管放磁力架上，去上清，每管加入 900ul RIP Immunoprecipitation Buffer

3. 迅速解凍一步制備的細胞裂解液，14,000rpm，4℃離心 10min。吸取 100ul 上清液于 上一步的磁珠-抗體復合物中，使得總體積為 1ml

4. 4℃孵育 3h 至過夜

5. 短暫離心，將 enpendoff 管放在磁力架上，棄上清

6. 加入 500ul RIP Wash Buffer，渦旋震蕩后將 enpendoff 管放在磁力架上，棄上清，重復 清洗 6 次

（四）. RNA 純化

A. 實驗前準備

1.槍、槍頭、enpendoff 管紫外照射 30min，噴DEPC水以除RNA 酶

2. Salt SolutionⅠ、Salt SolutionⅡ、RIP Wash Buffer、Proteinase K、10%SDS、Precipitate Enhancer 置于冰上

3.RNase-free 的乙醇、異戊醇

4.DEPC 水置于冰上

5. 離心機預冷

6. 冰盒

B. RNA 純化過程

1.準備 Proteinase K Buffer。每個樣品需 150ul

2.用 150ul Proteinase K Buffer 重懸上述磁珠-抗體復合物

3.55℃孵育30min

4.孵育完之后，將 enpendoff 管置于磁力架上，將上清液吸入一新的 enpendoff 管中

5.于每管上清液中加入250ulRIP Wash Buffer

6.于每管加入400ul苯酚：異戊醇，渦旋震蕩15s，室溫下14,000rpm離心10min

7.小心的吸取350ul上層水相，吸入另一新的 enpendoff 管

8.于每管加入400ul，渦旋震蕩 15s，室溫下 14,000rpm 離心 10min

9.小心的吸取300ul上層水相，吸入另一新的 enpendoff 管

10.每管加入 50ul Salt SolutionⅠ，15ul Salt SolutionⅡ,5ul Precipitate Enhancer ，850ul 無水乙醇(無 RNase)，混合，-80℃保持1h至過夜

11.14,000rpm，4℃離心 30min，小心去上清

12.用 80%乙醇沖洗一次，14,000rpm，4℃離心 15min，小心去上清，空氣中晾干.

13.10-20ulDEPC水溶解，-80℃保存，送測序或進行下游實驗。

 小鼠MCP-1檢測試劑盒

服務目的：

測定兩種目的蛋白質是否在細胞內結合；也可用于測定確定某種特定蛋白質的新的作用 搭檔。

服務原理：

以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法，當細胞 在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留 了下來。如果用蛋白質 x 的抗體免疫沉淀 x，那么與 x 在體內結合的蛋白質 y 也能沉淀 下來。 服務材料：

試劑：蛋白提取試劑盒、非離子變性劑（NP-40、TritonX-100）、PBS、TBS、相應的 IgG、Protein A 或 Protein G 瓊脂糖凝膠珠、SDS-PAGE 電泳、上樣緩沖液。

儀器：振蕩器、蛋白電泳儀、恒溫箱、脫色搖床。

服務流程：

1）用其特定蛋白的抗體與 ProteinA/G 相結合(Flag IP Kit 已結合上)；

2）用抗體成點特定蛋白，特定蛋白已結合了與其相互作用蛋白；

3）通過洗滌得到純復合蛋白后用感興趣蛋白抗體通過 WB 方法檢測其 IP 結果；

4）提交 WB 圖與分析結果和實驗報告。

服務方法：

1、蛋白樣品準備。收集細胞或組織，在非變性條件下裂解細胞，釋放蛋白。

2、選做去除非特異性結合。取待測樣品，選用和免疫共沉淀時使用的 IgG 種屬相同的 普通 IgG 與瓊脂糖凝膠珠混合，4 oC 慢搖 30min-2h。離心取上清。

3、免疫共沉淀。加一抗，4 oC 慢搖過夜。加瓊脂糖凝膠珠，4 oC 慢搖 1~3h。瞬時離心 棄上清。PBS 洗沉淀 5 次。

4、加電泳上樣緩沖液，煮沸用于 SDS-PAGE 電泳。

技術

1、靈敏度高，無內源性干擾；

2、檢測范圍寬，大于 7 個數量級；

3、檢測速度快，樣品無需孵育等預處理；

4、操作簡便，可以在同一管內完成 2 個熒光素酶檢測。

服務內容

1、構建熒光素酶載體（或客戶自備載體）；

2、細胞培養與轉染；

3、熒光素酶檢測；

4、數據分析。

我們提供原始實驗數據、實驗報告質量保證轉染試劑、高靈敏度熒光素酶檢測試劑盒，確保結果的可靠性

服務原理：

在細胞生物學研究中，有些靶蛋白表達水平不高，難以用免疫印跡的方法檢測到。 為此可用特異性識別靶蛋白的抗體進行免疫沉淀，純化和富集靶抗原。

免疫沉淀是指可溶性抗原與相應抗體在電解質存在的情況下，按適當比例混合而成 可見沉淀物的現象。免疫沉淀技術是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合或細菌蛋白質 的“protein A”特異性的結合到免疫球蛋白的 Fc 片段的現象開發出來的方法。免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其基本原理是細胞裂解液 中加入抗體，與抗原形成特異免疫復合物，經過洗脫、收集免疫復合物，然后進行 SDS-PAGE 及 Western blot 分析。

服務流程：

細胞或組織裂解---裂解液預清除---蛋白及抗體反應----復合物及珠子交聯----蛋白及珠子分離----收集蛋白，WB分析

客戶提供： 1.細胞或組織。 2.目的蛋白信息。 3.目的蛋白抗體。

交付結果： 1.免疫沉淀蛋白樣品。 2.WB 電子分析報告。

產品定義

PRM（平行反應監視，parallel reaction monitoring）是一種基于高分辨、質譜的離子監視技術，能夠對目標蛋白質、目標肽段（如發生翻譯后修飾的肽段）進行選擇性檢測，從而實現對目標蛋白質/肽段進行定量。

技術原理

PRM技術基于高分辨、質譜（如Orbitrap系列），先利用四級桿質量分析器的選擇檢測能力，在一級質譜中（Q1）選擇性地檢測目標肽段的母離子信息；隨后在collision cell中對母離子進行碎裂；后利用高分辨、高質量精度分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片的信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。

相比于傳統的SRM/MRM技術，PRM技術將采集二級信息所用的四級桿質量分析器替換為更高分辨、更高質量精度的分析器，實現了從目標離子對檢測到全部目標離子碎片檢測的轉化。因此，PRM技術不僅具有SRM/MRM的靶向定量分析能力，還同時具備了定性能力。其在定量分析中的還體現在：（1）質量精度達到ppm級，能夠比SRM/MRM更好地排除背景干擾和假陽性，有效提高復雜背景下的檢測限和靈敏度；（2）對子離子進行全掃描，無需選擇離子對和優化碎裂能量，更容易進行方法學建立；（3）更寬的線性范圍：增加至5-6個數量級。

服務

通量高：每個樣本30×以上的數據產出量，海量數據用于分析

覆蓋度高：能檢測到99%的SNP

分辨率高：單堿基分辨率

檢測范圍廣：可得到更加、可靠的基因變異信息，如somatic snv、indel和somatic  cnv等

數據質量好：數據偏差小、高均一性，真實反應樣本基因組信息

基因組重測序：

對已知基因組進行重測序，可進行CNV、SNP、染色體結構變異等基因組變異的研究，可以此尋找和疾病，如癌癥等，相關的生物標記。

宏基因組測序：可對某一環境下的所有微生物進行基因組測序，能夠揭示微生物群落多樣性、種群結構、進化關系、功能活性、相互協作關系及與環境之間的關系。

外顯子組序列捕獲與測序

通過外顯子捕獲技術獲得外顯子區域DNA序列進行測序，可對各種基因突變進行檢測，尋找相關的致病基因和易感基因。

iTRAQ技術原理：

iTRAQ試劑為可與氨基酸N端及賴氨酸側鏈連接的胺標記同重元素(isobaric)。在質譜圖中，任何一種iTRAQ試劑標記的不同樣本中的同一蛋白質表現為相同的質荷比。

在串聯質譜中，信號離子表現為不同質荷比(114～117)的峰，因此，根據波峰的高度及面積，可以得到蛋白質的定量信息。

技術特點:

1．可同時標記2~8 個樣本。

2. iTRAQ技術不僅可發現胞漿蛋白，還有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技術可檢測出低豐度蛋白、強堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。

3.可標記修飾后的氨基酸，因此對磷酸化蛋白等翻譯后修飾蛋白進行定性定量研究。

4.報告離子的相對分子質量較低(113~121)，低分子量區是質譜定性(質量確定)和定量(豐度比較)較為準確的區域，因此質譜檢測更為靈敏可靠。

iTRAQ試劑包括三部分：

1. 報告基團（reporter group）：相對分子量為113-121Da（無120），因此iTRAQ試劑可同時標記8組樣品。

2. 平衡基團（balance group）：相對分子量為192-184Da (無185)，使得八種iTRAQ試劑分子量均為305 Da，保證標記的同一肽段m/z相同。

3. 肽反應基團：能與肽段N端及賴氨酸側鏈氨基發生共價連接，從而標記上肽段拿到蛋白樣品之后，不同組的樣品先分別進行等量酶切，每一個酶切得到的肽段樣品選擇一種標記試劑進行標記反應（每一個肽段至少含有一個游離的氨基進行反應）；然后將經過不同標記的肽段樣品混合后進行后續的質譜分析。

 小鼠MCP-1檢測試劑盒