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價(jià)格：電議
所在地：北京
型號(hào)：KA.PCR015.01
更新時(shí)間：2017-10-10
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公司地址：北京市海淀區(qū)上地信息路12號(hào)
屈旺旭(先生)
非洲豬瘟病毒檢測(cè)試劑盒說明書20170204版
（Taqman探針一步法實(shí)時(shí)熒光RT-PCR）
編號(hào)：KA.PCR015.01
規(guī)格：50頭份
介紹：非洲豬瘟(African Swine fever，East African Swine fever,ASF)，是一種急性，發(fā)熱傳染性很高的濾過性病毒所引起的豬病，其特征是發(fā)病過程短，但死亡率高達(dá)，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱，皮膚發(fā)紺，淋巴結(jié)，腎，胃腸粘膜明顯出血。衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須通報(bào)疾病。
用途：該試劑盒用于對(duì)ASF進(jìn)行檢測(cè)，有助于對(duì)ASF的實(shí)驗(yàn)室診斷、監(jiān)測(cè)和流行病調(diào)查。
原理：本試劑盒采用一步法實(shí)時(shí)熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(One-Step Real Time RT-PCR) ，結(jié)合Taqman技術(shù)，對(duì)特異核酸進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。
試劑盒的組成
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試劑名稱 |
數(shù)量 |
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ASF反應(yīng)液 |
550μL×1管 |
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ASF酶 |
40μL×1管 |
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ASF引物探針 |
100μL×1管 |
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無核酸水 |
1000μL×1管 |
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ASF陰性對(duì)照 |
1000μL×1管 |
|
ASF陽性對(duì)照 |
150μL×1管 |
保存期及貯藏條件：本產(chǎn)品-20℃避光可保存12個(gè)月。
樣品收集，操作和儲(chǔ)存
1. 選擇發(fā)病早期，無菌采樣并立即送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病毒檢測(cè)。
2. 樣品短期可在4℃冷藏保存，較長(zhǎng)時(shí)間保存應(yīng)在--20℃或者-70℃，并且避免反復(fù)凍融。
檢測(cè)步驟
1.核酸提取
樣品進(jìn)行適當(dāng)處理后，可采用本公司的核酸提取試劑盒，該試劑盒可用于對(duì)樣本中病毒RNA的提取，請(qǐng)按照提取試劑盒說明書進(jìn)行操作。也可選擇其他合適的商品化產(chǎn)品。
2.擴(kuò)增試劑的準(zhǔn)備
將樣品數(shù)+1份陰性對(duì)照+1份陽性對(duì)照設(shè)為N，計(jì)算試劑所需量，反應(yīng)體系配制見下表
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試劑名稱 |
N份用量（20μL 體系） |
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ASF反應(yīng)液 |
10μL×（N+1） |
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ASF酶 |
0.5μL×（N+1） |
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ASF引物探針 |
1.8μL×（N+1） |
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無核酸水 |
5.7μL×（N+1） |
將各試劑按照表中用量加入無菌離心管中，充分混勻，短暫離心后在PCR反應(yīng)管中分別加入18μL混合液。
3.加樣
將制備好的樣本，陰性對(duì)照，陽性對(duì)照各取2μL分別加入對(duì)應(yīng)反應(yīng)管中，加完后蓋緊PCR反應(yīng)管蓋，置于PCR儀上。
4.熒光PCR擴(kuò)增與信號(hào)收集
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循環(huán)數(shù) |
溫度（℃） |
時(shí)間 |
數(shù)據(jù)收集位點(diǎn) |
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1 |
45 |
15min |
- |
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1 |
95 |
2min |
- |
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40 |
95 |
15s |
- |
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60 |
1min |
數(shù)據(jù)收集 |
注：報(bào)告基團(tuán)選FAM,淬滅基團(tuán)選NONE。
結(jié)果成立原則
陽性對(duì)照：CT值＜30并有明顯的擴(kuò)增曲線。
陰性對(duì)照：無CT值或者CT值>37，線性為直線或者輕微斜線，無明顯擴(kuò)增曲線。
以上要求需同時(shí)滿足，否則本次實(shí)驗(yàn)無效，需要重新進(jìn)行。
結(jié)果判定
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CT值 |
樣本檢測(cè)結(jié)果 |
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<30并有明顯的擴(kuò)增曲線 |
陽性，樣本中檢測(cè)出ASF。 |
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30-37 |
可疑，需重復(fù)檢測(cè)。若第二次檢測(cè)CT值仍為30-37并有明顯擴(kuò)增曲線則判定為陽性，否則為陰性。 |
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>37并無擴(kuò)增曲線 |
陰性，樣本中未檢測(cè)出ASF。 |
注意事項(xiàng)
1.反應(yīng)體系應(yīng)在特定配液區(qū)或者超凈工作臺(tái)中配制，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格控制污染。
2.PCR整個(gè)試驗(yàn)分配液區(qū)、模板提取區(qū)、擴(kuò)增區(qū)。流程順序?yàn)榕湟簠^(qū)→模板提取區(qū)→擴(kuò)增區(qū)。嚴(yán)禁器材和試劑倒流。
3.使用不含熒光物質(zhì)的一次性手套，一次性離心管。
4.反復(fù)凍融試劑將減低檢測(cè)靈敏度，本試劑盒應(yīng)在5次內(nèi)用完.
5.-20℃保存的各試劑管使用前應(yīng)在室溫下完全融化，液體融化后需徹底混勻，2000 rpm離心15 s ，使用后立即放回-20 ℃。
6.在RNA提取過程中，避免RNA酶污染，盡量縮短操作時(shí)間。
7.注意防止試劑盒組分受污染。不要使用超過有效期限的試劑，試劑盒之間的成分不要混用。
8.PCR反應(yīng)管避免氣泡存在，管蓋需蓋緊。
9.不同批次的試劑盒勿混用。
免責(zé)聲明：以上所展示的[KA.PCR015.01 非洲豬瘟熒光PCR檢測(cè)試劑盒]信息由會(huì)員[北京大有泰萊生物技術(shù)有限公司]自行提供，內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由發(fā)布會(huì)員負(fù)責(zé)。
