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價格：電議
所在地：上海
型號：
更新時間：2017-06-14
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公司地址：上海各大醫院
張鑫(先生)
1．實驗材料及試劑
1.1 AAH-GF- G1試劑盒，試劑盒包含內容：
? 玻片芯片---（RayBio® Human Growth Factor G1 Microarray slides (1個玻片上有4個或者8個陣列)
? 生物素標記抗體---（Biotin-Conjugated Anti-cytokines，4個陣列配1管，8個陣列配2管）
? 1500×熒光標記鏈霉親和素-----（Cy3 equivalent，1管）
? 1X封閉緩沖液---（Blocking Buffer, 30ml)
? 20X的洗液I ---（20X Wash Buffer I，30 ml)
? 20X 的洗液II---（20X Wash Buffer II, 30 ml)
? 2X細胞裂解液---（2X Cell Lysis Buffer，10ml）
? 玻片芯片配件--（玻片框架、墊圈、搭扣邊、密封條）
? 30ml管---（tube）
? 操作手冊
1.2 所需除試劑盒以外的材料及儀器：
? 塑料離心管(2-5ml，50ml)
? 搖床
? 塑料保鮮膜
? 雙蒸餾水
? Genepix熒光掃描儀
? Thermo Scientific Wellwash Versa芯片洗板機
1.3 樣品：
8個細胞上清
2 、實驗步驟
2.1 玻片芯片的完全干燥
將玻片芯片從盒子中取出來，在室溫平衡20-30min后，將包裝袋打開，揭開密封條，然后將芯片放在真空干燥器或者室溫干燥1-2小時。
2.2 封閉和孵育
1 每個芯片孔中加入100μL的1×封閉液，室溫搖床上孵育30min，避免產生氣泡；
2抽去封閉液，每個孔中添加100μL樣品（原液），一個陣列一個樣品；(4 ℃振蕩過夜孵育。樣品離心13000rpm,8min)
3 使用Thermo Scientific Wellwash Versa芯片洗板機清洗玻片，分為兩步，先用1×洗液I進行清洗，每孔250μL的1×洗液I，清洗6次，每次震蕩10s，震蕩強度選擇高，用去離子水稀釋20×洗液I。然后換用1×洗液II通道進行清洗，每孔250μL的1×洗液II，清洗5次，每次震蕩10s，震蕩強度選擇高，用去離子水稀釋20×洗液II。
4配制生物素標記抗體，快速離心生物素標記抗體的小管，每個小管加入300μL的1×封閉液，混合均勻。每孔加入70μL生物素標記抗體；
5清洗，同步驟3).
6 每孔加入70μL的1500倍稀釋的熒光劑-鏈霉親和素 （快速離心后加入1.5mL的封閉液到熒光劑-鏈霉親和素的小管），用密封條貼住玻片，然后用鋁箔紙包住玻片避光室溫震蕩孵育1-2個小時。（此步也可在4℃過夜孵育）
7 清洗，同步驟3).
2.3 熒光檢測
采用激光掃描儀例如Axon GenePix掃描信號， 采用Cy3或者綠色通道（激發頻率=532nm）
1） 掃描儀器： GenePix 4000B Microarray Scanner
2） 產地：MoLecμLar Devices, LLC；1311 OrLeans Drive SunnyvaLe, CA 94089-1136 United States
3） 掃描參數：PMT: 650, WaveLengh：532nm； resoLution：10um
采用芯片分析軟件提取數據，采用AAH-GF-G1的數據分析軟件來進行數據分析。
實驗注意事項
A 玻片的操作
1) 不能觸摸玻片的表面，因為玻片芯片非常靈敏，只能接觸玻片的邊緣；
2) 操作實驗時候，請戴上橡膠手套（不掉粉末），以免污染試劑和玻片；
3) 避免打碎玻片
4) 保持實驗操作環境整潔；
B 孵育
1) 樣品和試劑孵育過程中，保證完全覆蓋住玻片，且不能使玻片干燥
2) 孵育過程中避免產生氣泡
3) 孵育過程和清洗過程保持在搖床上輕搖
4) 在孵育過程中，用密封條將玻片芯片封閉，尤其是當孵育時間超過2個小時，或者樣品、試劑的體積小于70μL的時候。
5) 避免附近孔的交叉污染，鄰近孔的液體避免溢出污染。
6) 封閉、樣品孵育、檢測抗體孵育、Cy3-鏈霉親和素孵育都可以在4℃孵育過夜，但是請務必封閉玻片芯片非常嚴密，以免液體蒸發；
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