高速逆流色譜儀 ---日本System公司
介紹
高速逆流色譜是液相色譜的一種新技術(shù)，無(wú)需載體，從幾種色譜原理方法可以清晰說(shuō)明
大約50年前，根據(jù)對(duì)兩種液體進(jìn)行分配的理念，產(chǎn)生了兩種相似的方法：逆流分配技術(shù)和液-液色譜分配技術(shù)，即：逆流色譜和液相色譜。30年前，日本Sanki Engineering Ltd.利用前一種技術(shù)開(kāi)發(fā)出了高性能的逆流色譜儀（HPCPC），它結(jié)合了液相色譜中的快速、高效和先進(jìn)技術(shù)。HPCPC尤其在利用色譜技術(shù)進(jìn)行半制備和全制備的應(yīng)用中倍受矚目，它和采用色譜柱技術(shù)的液相色譜在四個(gè)方面具有顯著優(yōu)勢(shì)：
● 無(wú)樣品損失：因?yàn)榱鲃?dòng)相和固定相都是液體，樣品可以全部回收。
● 大容量和高的分離能力：流動(dòng)相和固定相的體積比明顯很高，從而無(wú)需更大的理論塔板數(shù)，就可以獲得更大的容量和更高的分離能力。
● 十分靈活的兩相系統(tǒng)：（兩種、三種、四種溶劑混合）為了獲得一種純的化合物，實(shí)驗(yàn)中需要比較靈活的更改流動(dòng)相，HPCPC可以很方便地調(diào)整兩相的極性。
● 溶劑消耗少：相對(duì)于色譜柱制備系統(tǒng)，對(duì)于同樣的制備量，HPCPC的溶劑消耗量只有十分之一，使用逆流色譜在實(shí)驗(yàn)室完成分離后，可以直接放大到生產(chǎn)規(guī)模。
● 固定相價(jià)格低：另一個(gè)顯著優(yōu)點(diǎn)是逆流色譜的固定相是溶劑，相比色譜柱中的填充材料價(jià)格低很多；而且固定相可以很容易再生，一些添加的物質(zhì)如手性選擇劑或復(fù)雜的配位體可以無(wú)損失地回收，國(guó)際上出版的論文可以提供十分有用的信息和應(yīng)用參考。
新型的高速逆流色譜儀HPCPC廣泛地應(yīng)用于化學(xué)領(lǐng)域的純化，如抗生素、縮氨酸、丹寧酸、皂角苷、油脂、藥品等，將來(lái)的發(fā)展可以預(yù)見(jiàn)更大規(guī)模和產(chǎn)量的HPCPC設(shè)備出現(xiàn)，在化學(xué)領(lǐng)域?qū)⒏訌V泛地應(yīng)用，如手性藥物分離等。
與傳統(tǒng)制備液相的優(yōu)勢(shì)
● 逆流色譜儀HPCPC十分快速
由于固定相溶劑通過(guò)離心力保留在分配通道中，可以不用顧及分離精度的高低要求而讓流動(dòng)相的流速保持很高。
● 明顯優(yōu)于傳統(tǒng)制備液相
由于逆流色譜儀HPCPC不需要固定相，不會(huì)出現(xiàn)對(duì)十分昂貴的樣品產(chǎn)生不可逆轉(zhuǎn)的保留，而在傳統(tǒng)色譜柱的液相色譜中，經(jīng)常出現(xiàn)的變性和分解現(xiàn)象在逆流色譜不會(huì)產(chǎn)生，同時(shí)保留了原來(lái)的生物活性。而且在相同體積情況HPCPC柱子（轉(zhuǎn)子）的容量明顯比HPLC高很多，因而過(guò)載情況在HPCPC中幾乎不可能發(fā)生，大量樣品的純化可以連續(xù)運(yùn)行，近似100%的回收，不存在吸附和不可逆轉(zhuǎn)的保留。
● 無(wú)需色譜柱和填料更換
傳統(tǒng)色譜由于空隙的形成、硅膠的污染、上次運(yùn)行樣品成份的保留將不得不經(jīng)常更換昂貴的HPLC色譜柱。
● 只需很少的理論塔板數(shù)
兩峰之間要獲得理想的分離效果，HPCPC相比HPLC而言，只需很少的理論塔板數(shù)，例如：a（選擇性）=1.2和K（分配系數(shù)）=1，HPLC獲得基線分辨率（Rs=1.5）需要185000個(gè)理論塔板數(shù)，而HPCPC只需要2200個(gè)理論塔板數(shù)，這是從液相色譜的標(biāo)準(zhǔn)分離度方程式推算出來(lái)的結(jié)果。
● 在相同的運(yùn)行中，即可實(shí)現(xiàn)正相色譜，又可實(shí)現(xiàn)反相色譜
使用雙模式HPCPC，幾乎可以完成所有要求的樣品分離，包含極性/非極性、親水性/非親水性的復(fù)雜混合物，使用合適的手性HPCPC相還可以完成手性物質(zhì)的分離。
● 任何PH情況下都可以工作
HPCPC不需要考慮PH范圍的限制要求，而對(duì)于使用固體作為固定相支持情況下，經(jīng)常有對(duì)PH值的要求。
HPCPC技術(shù)創(chuàng)新，克服了以前逆流色譜的一些弊端
● 以前逆流色流的弊端(1):當(dāng)分離目標(biāo)比較復(fù)雜時(shí)，需要運(yùn)行很長(zhǎng)時(shí)間
HPCPC通過(guò)創(chuàng)新自動(dòng)化系統(tǒng)，克服了上述的弊端：
1) 執(zhí)行分離任務(wù)可以預(yù)先設(shè)定10個(gè)方案。
2) 執(zhí)行分離任務(wù)時(shí)可綜合分析不同分離條件（溶劑，旋轉(zhuǎn)，流量等），考慮連續(xù)多個(gè)方案中彼此間聯(lián)系，從而選擇適條件。
3) 連續(xù)相同的多任務(wù)分離工作，在固定相一樣的情況下，可以很容易完成（相同的條件下，樣品的分離手段重現(xiàn)性非常好），也可輕松連接自動(dòng)進(jìn)樣器和餾分收集器，自動(dòng)完成。
4) 通過(guò)與計(jì)算機(jī)的數(shù)據(jù)采集程序相連接，很容易對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理；也可以使用計(jì)算機(jī)中預(yù)置的程序。
● 以前逆流色流的弊端(2):要很長(zhǎng)時(shí)間才能確定合適的分離條件
HPCPC通過(guò)提供小的轉(zhuǎn)子，只有以前型號(hào)1/3的體積來(lái)克服了上述的弊端：
HPCPC原理
HPCPCTM是一個(gè)新的液相色譜技術(shù)，利用液液兩相的逆流分配，在沒(méi)有固體填料的情況下，執(zhí)行復(fù)雜的化學(xué)物質(zhì)的混合物分離。它以液體溶劑替代了傳統(tǒng)的制備型高效液相色譜填充柱為固定相和另一液體溶劑做流動(dòng)相在一個(gè)高性能的離心系統(tǒng)分區(qū)進(jìn)行操作。不需使用固態(tài)固定相，而是利用離心力產(chǎn)生的恒定力場(chǎng)將固定相保留在由管道連接的一系列的腔體中。傳統(tǒng)固態(tài)填充柱的分離量一般只包含2%-7%的固定相重量中，嚴(yán)重限制了它的分離能力，而在HPCPC系統(tǒng)中該列包含50%-80%于固定相中，分離能力大大提高。固定相液體分散于眾多的腔體單元中，流動(dòng)相液體微滴通過(guò)不斷通過(guò)固定相液體從而分離各個(gè)成分。在任意兩相混合溶劑和任何PH值條件下，都能進(jìn)行正相和反相色譜分離。
注入一個(gè)樣品后，通過(guò)流動(dòng)相帶入逆流色譜儀中，使之進(jìn)入廣泛分布在一系列的管道腔體中，在其分配系數(shù)差異的基礎(chǔ)上洗脫，同時(shí)各組分間在兩相液體中相互分離。
HPCPC正相及反相一次雙向洗脫模式
在一個(gè)兩相溶劑系統(tǒng)中，可以通過(guò)正相或反相洗脫來(lái)實(shí)現(xiàn)其分離過(guò)程，雙向模式的HPCPC分離 5個(gè)組分混合物（a,b,c,d和e）的過(guò)程如下，其中它們的分配系數(shù)為a＞b＞c＞d＞e。
（1）正相分離 （2）正相洗脫
(1) 分配系數(shù)較大的組分（a和b）主要是存在與下層親和力強(qiáng)的固定相中。
(2) 分配系數(shù)較小的組分（c,d和e）隨著上層流動(dòng)相洗脫依次分離，同時(shí)固定相中的a和b組分相互之間也在緩慢分離。
（3）回流 （4）反相洗脫
(3) 在組分c,d和e洗脫完成之后，上層流動(dòng)相繼續(xù)循環(huán)洗脫至組分a和b完全分離。
(4) 改變上下相使之相反后原下層為流動(dòng)相，同時(shí)洗脫方向反向從而分離出組分a和b。
（5）一次雙相洗脫示意圖
技術(shù)參數(shù)
●
● 轉(zhuǎn)速：1500RPM
● 清洗轉(zhuǎn)速：300RPM
● zui小流量：0.1ml/min
● zui大流量：30ml/min
● 清洗流量：20ml/min
● 流量：5ml/min
● 進(jìn)樣閥：四通開(kāi)關(guān)閥
● 顯示屏：LCD顯示
● 轉(zhuǎn)子材質(zhì)：PPS和不銹鋼
● 轉(zhuǎn)盤(pán)數(shù)量：4個(gè)轉(zhuǎn)盤(pán)/1組
● 轉(zhuǎn)子尺寸：Φ200/H20mm
● 分割池?cái)?shù)量：712
● 分割池長(zhǎng)度：15mm
● 離心半徑：82.5mm
● 柱體積：80ml
● zui大壓力：60kg/cm2
● 安全保護(hù)：開(kāi)蓋自動(dòng)停止
● 進(jìn)出口管線：1/16”(內(nèi)徑0.75mm，外徑1.0mm)
● 轉(zhuǎn)子重量：5kg
● 外形尺寸：330x475x480mm
● 重量：40kg
● 電壓：220V/50Hz/3A
zui高轉(zhuǎn)速：2000RPM
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