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價格：電議
所在地：北京
型號：HR0275-50mL
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更新時間：2023-05-31
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王欣(女士) （來電時請說是從給覽網(wǎng)看到我的)
使用方法：
1、裂解液的準備：
根據(jù)所需提取的樣本量，每500μL裂解液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2、在4℃,10000g條件下將菌液離心5min，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。
3、用PBS洗菌體2次。若為冷凍菌體直接進行下面操作步驟即可。
4、按每50-100mg濕重菌體樣本加入500μL裂解液，吹打混勻，置搖床室溫振蕩30-45分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。
● 如果沒有低溫振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
5、在4℃ 10000×g條件下將菌液離心5分鐘，將上清移入干凈離心管。
6、即得到細菌蛋白樣品。
7、將細菌總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱或直接用于下游實驗。
【注】：
● 建議用BCA方法進行蛋白定量。相關(guān)產(chǎn)品：HR0329。
● 蛋白樣品-80℃存放一年沒問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。
常見問題分析：
● 蛋白濃度低？
膜蛋白豐度比較低，處理部分樣本時可能沒有裂解完全，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
● 用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑中含有干擾Bradford 法的組份，導(dǎo)致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
● 提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。
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