肉毒桿菌AB型雙重熒光PCR檢測由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研試驗，我公司專注于細菌PCR檢測試劑盒產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應，為您提供的肉毒桿菌AB型雙重熒光PCR檢測質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術服務，以優(yōu)良的價格、優(yōu)質(zhì)的服務、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關系，擁有較好的企業(yè)信譽和品牌形象。 主營產(chǎn)品:血清、抗體、抗原、核酸提取、核酸純化等生化試劑

特別提示：包括肉毒桿菌AB型雙重熒光PCR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：肉毒桿菌AB型雙重熒光PCR檢測試劑盒
英文名稱：Botulinus A/B Fluorescent PCR detection kit
產(chǎn)品貨號：SYA017
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒

本試劑盒適用于檢測糞便、水、血液等樣本肉毒桿菌(BL) A/B型DNA，用于肉毒桿菌(BL) A/B型感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。
【原理】
本試劑盒用一對肉毒桿菌(BL)A/B型特異性引物和一條特異性熒光探針，經(jīng)過裂解提取DNA，后者在Taq DNA聚合酶作用下，配以FQ-Buffer(內(nèi)含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，通過PCR-熒光探針體外擴增法對肉毒桿菌(BL) A/B型DNA進行體外擴增，從而達到快速檢測肉毒桿菌(BL) A/B型之目的。
【組成】
名稱 數(shù)量 規(guī)格
核酸提取液 1管 2ml/管
Taq 酶系 1管 50μl/管
BL-A/B-qPCR MIX 1管 1000ml/管
BL-A/B -陽性質(zhì)控品 1管 50μl/管
陰性質(zhì)控品 1管 250μl/管
【儲存條件】-20℃保存，避免反復凍融。
【試劑規(guī)格及有效期】48T/盒，有效期6個月。
【適用儀器】
雙通道及以上PCR儀器。
【標本采集和保存與運輸】
1. 人或動物：
采集新鮮糞便，取黏液膿血部位標本，密閉送檢。
2．血液：
采集新鮮抗凝血(非肝素抗凝)，密閉送檢。
【使用方法】
1． DNA提取
1.1 糞便：挑取米粒大小糞便(盡可能取黏液膿血部分)，于放置有0.5ml生理鹽水的離心管中，振蕩混勻，13000rpm離心2分鐘。棄上清，沉淀中直接加入100μl DNA提取液充分混勻，沸水浴10min，13000rpm離心5min取上清4μl做PCR反應。
1.2 水標本：取水樣3ml，13000rpm離心2min；棄上清，沉淀中直接加入100μl DNA提取液充分混勻，沸水浴10min，13000rpm離心5min取上清4μl做PCR反應。
1.3 血液標本：取2ml抗凝血，靜置待自然分層，吸取上層（血漿層）及中層（Buffy coat層），13000rpm離心2分鐘。棄上清，沉淀中直接加入100μl DNA提取液充分混勻，沸水浴10min，13000rpm離心5min取上清4μl做PCR反應。
2．PCR擴增
從試劑盒中取出BL-A/B-qPCR MIX、Taq酶系，室溫融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N（N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照），每個測試反應體系配制如下表：
試劑 BL-A/B-qPCR MIX Taq酶系
用量 20μl 1μl
計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入21μl，向每管中加入處理后樣品或BL-陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品4μl，10000rpm瞬時離心10秒。將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)，推薦循環(huán)條件:94℃→2分鐘，后94℃ 30秒→55℃ 45秒，40個循環(huán)。
熒光通道選擇：檢測選擇FAM通道和HEX/VIC/JOE通道。如果使用ABI系列儀器，請務必在passive reference和quencher處均選擇“NONE”。
3. 結(jié)果分析判定
FAM通道：Ct值≤35肉毒桿菌A型為陽性；Ct 值在35-40個循環(huán)之間，為灰區(qū)，需要進行重復試驗。重復試驗之后，如果Ct 值仍然在37-40個循環(huán)之間，判斷肉毒桿菌A型為陽性，沒有熒光值增長肉毒桿菌A型為陰性。
HEX/VIC/JOE通道：Ct值≤35肉毒桿菌B型為陽性；Ct值在35-40個循環(huán)之間，為灰區(qū)，需要進行重復試驗。重復試驗之后，如果Ct值仍然在37-40個循環(huán)之間，判斷肉毒桿菌B型為陽性，沒有熒光值增長肉毒桿菌B型為陰性。
【質(zhì)控標準】
陰性質(zhì)控品：FAM和HEX/VIC/JOE通道全部陰性。
BL-陽性質(zhì)控品：FAM和HEX/VIC/JOE通道的Ct值均應小于30.0。
以上條件應同時滿足 ，否則，此次試驗視為無效。
【注意事項】
初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
所有使用的離心管應高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
PCR操作應嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)等)，防止實驗室污染。
樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行，以免污染。
試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。


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貨號	名稱	規(guī)格
SYA007	副溶血弧菌單重熒光PCR檢測試劑盒	48次/盒
SYA060	副傷寒沙門桿菌單重熒光PCR檢測試劑盒(有甲乙丙三型)	48次/盒
SYA072	副溶血性弧菌耐熱相關溶血素(TRH)單重熒光PCR檢測試劑盒	48次/盒
SYA077	嗜水氣單胞菌單重熒光PCR檢測試劑盒	48次/盒
SYA097	副溶血性弧菌/霍亂弧菌雙重熒光PCR檢測試劑盒	48次/盒
SYA100	空腸彎曲菌/結(jié)腸彎曲菌雙重熒光PCR檢測試劑盒	48次/盒

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名稱：副溶血弧菌單重熒光PCR檢測試劑盒
貨號：SYA007
規(guī)格：48次/盒

名稱：空腸彎曲菌單重熒光PCR檢測試劑盒
貨號：SYA010
規(guī)格：48次/盒

名稱：副傷寒桿菌單重熒光PCR檢測試劑盒
貨號：SYA012
規(guī)格：48次/盒

名稱：炭疽桿菌單重熒光PCR檢測試劑盒(分別有檢測Capa/Rob/PAG的試劑盒)
貨號：SYA014
規(guī)格：48次/盒
一、簡介
本試劑盒用三對炭疽桿菌特異性引物(Cap/robB/pagA)，各結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術對炭疽桿菌核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

二、用途
該試劑盒適用于檢測皮膚水泡液、咽拭子、可疑食物等樣本中的炭疽桿菌特異性核酸序列(pX01質(zhì)粒-pagA基因；pX02質(zhì)粒-cap基因；染色體-rpoB基因)進行擴增，用于炭疽桿菌感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供臨床參考。

三、試劑盒組成(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
反應液(qPCR MIX) 1管 480μL/管
pagA熒光引物和探針 1管 240μL/管
Cap熒光引物和探針 1管 240μL/管
rpoB熒光引物和探針 1管 240μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
陽性對照(PTC) 1管 50μL/管

四、熒光PCR儀器適用范圍
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。

五、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個月。

六、樣品采集、前處理與DNA提取
6.1 樣品采集
皮膚炭疽，取水泡液1mL；肺炭疽，采集咽拭子標本，放入標本采集管中；腸炭疽，取糞便1g。
6.2 樣本前處理：
固體樣本：手術剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中，液體樣本：直接取上100μL于1.5mL滅菌離心管中。
6.3 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)，并按照相應試劑盒說明進行操作。
對上述處理好的樣本加入50uL核酸提取液，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

七、檢測步驟
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(qPCR MIX)、引物及探針，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 10μL N×10μL
Cap或robB或pagA引物及探針 5μL N×5μL
總量 15μL N×15μL
計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入實時熒光PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM，淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析
8.1 結(jié)果分析條件設定
直接讀取檢測結(jié)果?；€和閾值設定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
(1) 陰性對照(NTC)：不應產(chǎn)生任何的擴增曲線。
(2) 陽性對照(PTC)：均產(chǎn)生擴增曲線。
(3) 以上條件應同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結(jié)果判定
(1) 在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明核酸陽性。
(2) Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明核酸陰性。
(3) 如果Ct值>35，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
(4) 對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行qPCR檢測。如果重復擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，判為樣本陽性，表明核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項：
(1) 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
(2) 所有使用的離心管應高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
(3) PCR操作應嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)等)，防止實驗室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行，以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。


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