大鼠3-硝基酪氨酸 ELISA 檢測試劑盒生物試劑
發布日期：2012-11-29 瀏覽次數 ：1359
大鼠3-硝基酪氨酸 ELISA 檢測試劑盒生物試劑
本試劑僅供研究使用
試驗原理：
3-NT試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知3-NT濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將3-NT和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中3-NT的濃度呈比例關系。
自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。
大鼠3-硝基酪氨酸 ELISA 檢測試劑盒生物試劑
安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項
1． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7． 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
大鼠3-硝基酪氨酸 ELISA 檢測試劑盒生物試劑
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5． 每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。
局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。
大鼠3-硝基酪氨酸 ELISA 檢測試劑盒生物試劑
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。
結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的3-NT標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的3-NT含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3、檢測值范圍：0-80nmol/L
4、敏感度： 0.1 nmol/L
Methyl red sodium salt 甲基紅鈉 [845-10-3] 100g
Albumin, bovine, fraction V, cold alcohol isolation 牛血清白蛋白 [9048-46-8] 10g
Albumin, bovine, fraction V, heat shock isolation pH 7.0 牛血清白蛋白 [9048-46-8] 100g
Naphthol AS-D acetate 萘酚AS-D-乙酸酯 [528-66-5] 250mg
Albumin, bovine Solution, 20 mg/ml 牛血清白蛋白標準溶液 / 1ml
Albumin, bovine Solution, 0.5mg/ml 牛血清白蛋白標準溶液 / 0.5ml
Alcian blue 8GX 阿爾新藍8GX [33864-99-2] 1g
Alcian blue 8GX 阿爾新藍8GX [33864-99-2] 5g
Alcohol dehydrogenase >300U/mg 乙醇脫氫酶 [9031-72-5] 15KU
Alizarin 茜素 [72-48-0] 50g
Alizarin complexone 茜素絡合指示劑 [3952-78-1] 1g
Alizarin red 茜素紅 [130-22-3] 25g
Alcohol dehydrogenase >300U/mg 乙醇脫氫酶 [9031-72-5] 75KU
Alendronate sodium, trihydrate 阿侖膦酸鈉 [121268-17-5] 25g
Alizarin yellow GG 茜素黃 GG [584-42-9] 25g
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