英文名稱： :Human apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit
檢測方法：雙抗夾心法/酶聯(lián)免疫方法
規(guī)格：96T/48T
反應時間：3.5h
反應性：Human
樣本體積：100μL
檢測范圍：37.5 pg/mL – 1200 pg/mL。
特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
重復性：板內變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。
有效期：6個月
保存條件：2-8℃
可檢測多種生物樣品，包括：血清、血漿、體液如尿液、細胞培養(yǎng)上清液和細胞/組織裂解液等。
本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中人載脂蛋白B100(apo-B100)的含量。
實驗原理
人載脂蛋白B100(apo-B100)是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系。
試劑盒內容及其配制
樣本處理及要求
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4.細胞培養(yǎng)上清：取細胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。
5.其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測。
6.樣品應清澈透明，懸浮物應離心去除。
7.樣品收集后若在1周內進行檢測的可保存于2-8℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內檢測)，或-80℃（6個月內檢測），避免反復凍融。
8.如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品高值，請根據(jù)實際情況，做適當倍數(shù)稀釋（建議先做預實驗，以確定稀釋倍數(shù)）。
樣品稀釋指導：
用戶須估計樣品待測因子的含量，決定適當?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的佳檢測范圍。
為避免樣本中基質效應的影響，建議樣本少稀釋一倍。
以上方案僅供參考，樣品的稀釋應有詳細記錄。
注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
注意事項
1．為確保試驗結果的有效性，建議先做預實驗，以確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。
2．酶標板袋拆封后，盡快將不用的板孔放回，并放入干燥劑，保持酶標板干燥。
3．用戶在初次使用試劑盒時，應將試劑盒平衡至室溫，各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
4，TMB避光保存。
5，洗板過程非常重要，不充分的洗板易導致假陽性。
6．建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
7．請保持試驗過程的連續(xù)性，禁止酶標板干燥，因干燥會使酶標板上的生物成分迅速失活。
8．為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和試管。
9．禁止混用不同批次試劑盒內的試劑。
檢測步驟
1) 準備所有的試劑和梯度稀釋的標準品。板條加入300 μl 1×洗液靜置浸泡30 秒。
2) 標準品孔加入 100 μl 2 倍倍比稀釋的標準品。空白孔加入 100 μl 標準品稀釋液(血清/血漿樣本)或培養(yǎng)基(細胞培養(yǎng)上清樣本)。
3) 血清/血漿：樣本孔加入 90 μl 1×檢測緩沖液和 10 μl 樣本。細胞培養(yǎng)上清：樣本孔加入 100 μl 細胞培養(yǎng)上清。
4) 每孔加入 50 μl 1:100 稀釋的檢測抗體。步驟 2、3、4 在 15 分鐘內完成。
5) 封膜，室溫孵育 1.5 小時。
6) 洗滌 6 次。
7) 每孔加入 100 μl 1:100 稀釋的辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素。
8) 封膜，室溫孵育 30 分鐘。
9) 洗滌 6 次。
10) 每孔加入 100 μl 顯色底物，避光，室溫孵育 5 - 30 分鐘。
11) 每孔加入 100 μl 終止液。
12) 30 分鐘內，在 450 nm 波長檢測 OD 值，參考波長 570 nm 或 630 nm。
結果判斷
1. 以標準品的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標， 繪制標準曲線。 如有設置復孔，則應取其平均值計算。 以標準品的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。
2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標準曲線查出相應的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
3. 若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數(shù)。
