一步法單菌落質(zhì)粒DNA提取試劑盒說明書
產(chǎn)品編號：BTN70804
規(guī)格：50T
產(chǎn)品及特點：
本產(chǎn)品是在百奧萊博一步式質(zhì)粒DNA提取試劑盒（BTN70301）基礎上開發(fā)的、能夠從單個菌落快速提取質(zhì)粒DNA 的產(chǎn)品。它之所以能夠從單個菌落中提取到可以用常規(guī)電泳方法檢測得到的質(zhì)粒DNA 是由于一步式細菌裂解技術能夠使細菌釋放出其幾乎所有的質(zhì)粒DNA。本產(chǎn)品具有下列特點：
1. 不需過夜培養(yǎng)細菌就可以提取質(zhì)粒DNA，能為研究人員節(jié)約一天的寶貴時間。
2. 快速，整個過程只需要不到十分鐘（對一個樣品而言）。
3. 一步式裂解細菌，不使用強堿溶液，對DNA 損傷小。
4. 得到的質(zhì)粒DNA 足夠1-2 次電泳或酶切實驗，足夠多次PCR、測序和細菌轉(zhuǎn)化實驗。
5. 適用于高拷貝、中拷貝和低拷貝的質(zhì)粒。
格及成分：
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成分 |
規(guī)格 |
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溶液A |
5ml |
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離心吸附柱 |
50只 |
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離心吸附柱收集管 |
50只 |
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通用預洗液 |
50ml |
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通用洗柱液 |
100ml |
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DNA洗脫液2.0 |
10ml |
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說明書 |
1份 |
保存條件：
常溫運輸及保存（溶液A 需要4℃保存），有效期一年。
使用方法：
1. 用吸頭挑取一個直徑在2 mm 以上的菌落到100 μL 一步法單菌落質(zhì)粒DNA提取試劑盒溶液A 中（溶液A 用前搖勻），充分吹打或振蕩裂解直到裂解液變澄清。
2. 直接將裂解液全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫靜置2 分鐘使質(zhì)粒DNA 與膜結(jié)合。室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。
3. 在離心吸附柱中加入0.7 mL 的通用預洗液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。注意: 如果通用預洗液放置在低溫產(chǎn)生了沉淀，用前需要加熱到60℃左右使之融化，混勻后再用。
4. 再在離心吸附柱中加入0.3 mL 的通用預洗液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。此步預洗zui好別省略，否則DNA 純度不高。
5. 在離心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。
6. 再在離心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。此為第二次洗滌。
7. 再在離心吸附柱中加入0.4 mL 的通用洗柱液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。此為第三次洗滌，如果不洗滌三次，zui后得到的質(zhì)粒DNA 的OD260 和280 的比值達不到1.8。
8. 室溫12000-15000 g 離心半分鐘，甩干殘留液體。注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響后續(xù)的電泳上樣（DNA 沉不到加樣孔里去）和酶反應。
9. 將離心柱置于一個新的1.5 mL 自備塑料離心管中，加入30-100 μL DNA洗脫液2.0，室溫放置2 分鐘。如果將DNA 洗脫液2.0 預熱到65-80℃，則效果更好。
10. 室溫12000-15000 g 離心半分鐘，離心管底部溶液即為質(zhì)粒DNA，可以直接用于后續(xù)實驗或放冰箱長期保存。
