分枝桿菌DNA提取試劑盒說明書
產品編號:BTN70702
規格:50T
產品及特點:
分枝桿菌屬(Mycobacterium)是為古老的細菌,與人類的疾病相關的就有25種以上,包括引起結核病的結核分枝桿菌(Mycobacteria tubercμLosis)。近年來由于多重耐藥性分枝桿菌的出現,分枝桿菌再次成為人們關心的細菌。PCR快速診斷是目前檢測分枝桿菌的主流方法,但由于此類細菌具有十分獨特的堅硬的細胞壁,快速提取其基因組DNA一直是十分棘手的技術問題。本產品就是為解決這一問題而開發,具有下列特點:
1. 每克分枝桿菌濕重可以提取到3-4mg基因組DNA。
2. 操作簡單,整個過程約60分鐘左右,容易放量操作。
3. 適用于培養的分枝桿菌,也適用于含分枝桿菌的痰液等樣品。
4. 價廉物美,與國外同類產品相比質量相當,但價格。
規格及成分:
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成分 |
規格 |
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TE緩沖液 |
50ml |
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溶液A |
7.5ml |
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溶液B |
15 mL(棕色塑料瓶) |
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說明書 |
1份 |
保存條件:
常溫運輸及保存、有效期一年。
自備試劑:
氯fang、70%乙醇、無水乙醇。
使用方法:
注意:文獻報道部分分枝桿菌在DNA提取過程中還有形成菌落的能力,所以任何丟棄的溶液都必須按有傳染性的污染物品對待,并嚴格按有關部門要求進行消毒處理。
一: 如果細菌來于痰液樣品,則按下面方法進行預處理(本試劑盒不提供所需試劑,操作步驟僅供參考)
1. 用痰液收集器收集約5mL患者深咳痰并轉移到15mL塑料離心管中。
2. 加入等量的化痰液(2% NaOH、1.45%檸檬酸鈉、0.5% N-乙酰-L-半胱氨酸),震蕩使二者充分混勻。37℃放置25-40分鐘。此步處理可以使粘稠的痰液便于操作,同時可以裂解不屬于分枝桿菌的雜菌,只有分枝桿菌保持完整。
3. 5000 g離心5分鐘,棄上清液。分枝桿菌將沉淀在管底,可以直接用于DNA提取。也可以保存在-20℃待用。
二: 如果分枝桿菌來于培養的菌落,則按下面方法進行預處理
1. 刮取培養的菌苔到1 mL TE緩沖液中(裝在1.5mL塑料離心管中)并充分震蕩使細菌均勻重懸。如果是培養的液體菌液或其他液體樣品材料,則取1mL菌液到1.5 mL塑料離心管中。一次提取所需zui佳細菌用量為109 CFU左右。
2. 80℃加熱20分鐘殺滅分枝桿菌使之失去傳染性。
4. 常溫5000 g離心5分鐘,棄上清液。分枝桿菌將沉淀在管底,可以直接用于DNA提取。也可以保存在-20℃待用。
三: 分枝桿菌基因組DNA提取
1. 將150μL 65℃預熱過的溶液A加到上步得到的、有分枝桿菌沉淀的塑料離心管中,充分震蕩使細菌均勻懸浮。
2. 再加入300μL溶液B(呈乳濁狀)和300μL自備氯fang,充分震蕩混勻。
3. 將混合液-20℃放置直到液體凝固,一般需要20-60分鐘。一定要凝固后才能進入下一步。
4. 將樣品管放室溫融化后,12000-15000g室溫離心5分鐘,小心轉移上清到一新的離心管中。
5. 在上清液中加兩倍體積的無水乙醇,顛倒混勻后12000-15000g室溫離心10分鐘,小心棄上清。DNA將形成沉淀,不要丟失。
6. 在離心管中加1mL自備70%乙醇,短暫震蕩,12000-15000 g室溫離心3分鐘,棄上清。此步洗滌殘留鹽離子等雜質。
7. 重復上述操作一次。
8. 短暫離心離心管,小心吸棄殘留的液體(約50μL)。此步不要省略,否則殘留的液體(含乙醇)將會影響DNA電泳、酶切和PCR等反應。
9. 立即加入50-100μL TE緩沖液充分溶解DNA沉淀。
10. 直接取5-10μL電泳檢測DNA,其余放冰箱備用或用于后續反應。






