柱式病毒DNA提取試劑盒說明書
產品編號：BTN70701
規格：50T
產品及特點：
本產品是在一管式病毒DNA提取試劑盒的基礎上開發的、專門用于從血清(血漿)等液體樣品及拭子（咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、陰道拭子等）中提取微量病毒DNA 的產品，它具有下列特點：
1. 操作簡單，整個過程只需要20 分鐘左右，不需要額外在洗柱液中補加乙醇。
2. 靈敏度高，通過PCR 檢測到的zui終靈敏度可以達到30-50拷貝/mL。
3. 安全，不需要使用苯酚和氯fang等有機溶液。
4. 如果加上病毒離心富集步驟，zui多可以處理1.5 mL 液體病毒樣品。
5. 與PCR 和熒光PCR 兼容。
6. 價廉物美，遠高于國外同類產品。
7. 適用于各種材料，包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養細胞上清液等無細胞材料。
規格及成分：
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成分 |
規格 |
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溶液A |
30ml |
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離心吸附柱 |
50套 |
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通用洗柱液 |
50ml |
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DNA洗脫液3.0 |
10ml |
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說明書 |
1份 |
保存條件：
常溫運輸及保存，有效期一年。
自備試劑：
無，但需要自備RNase-free 的1.5 mL 離心管（耗材）。
使用方法：
1. 對于液體病毒樣品：在1.5 mL 離心管中加入0.1-0.2 mL 液體病毒樣品。如果病毒需要富集，可以將1.5 mL 液體在4℃ 24,000 g 冷凍離心60 分鐘，移棄1.3 mL 后剩下的0.2 mL 用于第2 步處理。對于拭子樣品：將一個拭子放入離心管中，加入1mL 自備的生理鹽水，振蕩器上充分振蕩半分鐘，然后轉移0.2 mL 到1.5 mL 塑料離心管中，用于第2 步處理。
2. 加入0.6 mL 溶液A 到一步得到的0.2 mL 樣品中，振蕩30 秒混勻后室溫放置10 分鐘。注意：溶液A 在4℃放置后可能會產生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
3. 短暫離心后將500 μL 溶液轉移到離心吸附柱中，室溫放置2 分鐘。
4. 12,000 rpm 室溫離心1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。
5. 將剩余溶液短暫離心后全部轉移到步驟3 的離心吸附柱中，室溫放置2 分鐘。
6. 12,000 rpm 室溫離心1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。
7. 加入0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。
8. 12,000 rpm 室溫離心1 分鐘（干甩），棄含穿透液的離心管。
9. 將干甩后的離心吸附柱套入到一個自備的RNase-free 的1.5 mL 離心管中，在離心吸附柱的濾膜的中部加入30-100 μL DNA 洗脫液3.0，然后室溫放置2 分鐘。
10. 12,000 rpm 室溫離心1 分鐘，離心管中的溶液即為病毒DNA 溶液。
11. DNA 樣品可以直接用于PCR，也可放-20℃長期保存。
疑難解答：
Q：提取液體樣品/病毒核酸(RNA 或DNA)為何很難？
A：原因一是量少。病毒顆粒中的RNA 或DNA 是作為遺傳物質保存，每個病毒zui多只攜帶幾個拷貝(而一個細胞中有上萬種RNA 分子，每種RNA 有很多拷貝)，同時其長度也十分有限(一般不到細胞基因組的萬分之一)，樣品中病毒數往往又不是很多，使得樣品中病毒核酸的dui量往往比一個細胞中核酸的dui量還少，所以操作中十分容易丟失。另外，由于得到的核酸dui量很少，不能使用電泳和測OD檢測，只能通過PCR 或RT-PCR 檢測，而PCR 或RT-PCR 的條件又需要優化，所以要確定提取是否成功十分不容易。
