柱式細菌DNA提取試劑盒說明書
產品編號：BTN60802
規格：50T(A)/50T(B)
產品及特點：
本產品是在細菌DNA提取試劑盒礎上開發的柱式升級產品，可以用于大多數革氏陽性和陰性細菌基因組DNA的快速提取。
1. 操作簡單，整個過程不到20分鐘。
2. 產率一般在5-20μg/mL過液培養的飽和菌液（108-109個細胞）。
3. OD260/280一般在1.8以上，可直接用于PCR、酶切、雜交等實驗。
4. DNA片段長度一般在40-50 Kb左右。
5. 每次提取可以處理0.1-1.5mL的細菌，也可以使用菌落。
6. 價廉物美，與國外同類產品相比質量相當，但價格。
7. 安全，本試劑盒對人體無害，無腐蝕性和刺激性氣味。
8. 本產品分A型（無溶菌酶，適用于革氏陰性細菌）和B型（含溶菌酶，適用于革氏陽性細菌）。
規格及成分：
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成分 |
A型 |
B型 |
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溶菌酶干粉 |
無 |
600mg |
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溶液A |
15ml |
15ml |
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溶液B |
7.5ml |
7.5ml |
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溶液C |
30ml |
30ml |
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離心吸附柱 |
50套 |
50套 |
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通用洗柱液 |
50ml |
50ml |
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DNA洗脫液2.0 |
10ml |
10ml |
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說明書 |
1份 |
1份 |
保存條件：
常溫運輸及保存（溶菌酶需要-20℃保存），有效期一年。
自備試劑：
氯fang、自備無菌水。
使用方法：
注意：溶液A和溶液B容易產生沉淀，溶液B十分粘稠，均需要放置在65℃預熱使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分搖勻。
一: 對革氏陰性細菌樣品，只需用A型
1. 將0.1-1.5 mL過夜培養的菌液轉移到1.5mL離心管中，12000rpm室溫離心1min沉淀細菌，棄上清。
2. 加入300μL預熱的溶液A到細菌沉淀中，充分吹打均勻。
3. 再加入150μL預熱的溶液B到離心管中，顛倒數次混勻。此時溶液中可能有白色絲狀懸浮物產生。由于溶液B比較粘稠，可以采取稱量方法取用，150μL約等于150-160 mg。也可以將1mL槍頭剪去一截再吸取。
4. 65℃放置3-5分鐘。如果室溫放置，DNA產量會降低10-20%。
5. 加入200 μL自備氯fang，震蕩混勻10-30秒，此時溶液將呈乳白色。
6. 12,000 rpm室溫離心2分鐘。此時上清液將變得透明，中間層有白膜。小心轉移上清液到一個新的1.5mL塑料離心管中，避免觸及中間層的白膜。
7. 加入1.5倍體積(約0.7mL)的溶液C，顛倒混勻后全部轉移到離心吸附柱中，室溫放置至少2分鐘。
8. 12,000 rpm室溫離心1分鐘，DNA將吸附在離心吸附柱的膜上，倒棄收集管中的穿透液。
9. 將0.5mL通用洗柱液加入離心柱中，12,000 rpm室溫離心1分鐘，棄穿透液。
10. 重復上步操作一次。
11. 空甩半分鐘去除殘留液體,將離心吸附柱轉移到新的1.5mL離心管中。
12. 加50-100μL通用洗脫液，室溫放置3-5分鐘。
13. 12,000 rpm室溫離心1分鐘即得DNA溶液。
14. 由于本產品使用的離心吸附柱吸附DNA的能力較強，可以重復上步操作一次以便得到更多的DNA。
15. 直接取5-10μL電泳檢測DNA，其余放冰箱備用。
二: 對革氏陽性細菌樣品，需用B型（含溶菌酶）
1. 將0.1-1.5 mL過夜培養的革氏陽性細菌12,000 rpm室溫離心1分鐘后, 重懸于0.6 mL溶菌液中（溶菌液配制:30 mL無菌水+600 mg溶菌酶，配制后zui好分裝成小管并放-20℃長期保存，每次只用一小管)，顛倒混勻5-10次后放37℃保溫至少30分鐘(有的革氏陽性菌種可能需更長時間，自己摸索)。
2. 12,000 rpm室溫離心10分鐘，小心棄上清。
3. 后續處理接上面的革氏陰性細菌提取步驟中的第2步。
三: 其他注意事項
1. 可以直接使用細菌菌落提取DNA，操作時直接將細菌菌落挑入到溶液A中，后續操作同上。
2. 從單個菌落中提取到的DNA較少，所以只用30μL通用洗脫液洗脫。
使用效果：
圖注:用本產品提取1.0mL過夜培養的E.coli Tg1細菌，DNAzui后溶于100μL TE中，取20μL上樣。M表示全長的λDNA,其余均為提取的樣品DNA。
