T4 DNA連接酶說明書
產品編號：BTN60609
規格：200U/1000U
產品及特點：
T4 DNA連接酶從表達T4 gene 30的E.coli細胞中分離純化而得，由一個分子量為68 KDa的單亞基組成，它具有下列功能:
1. 催化連接反應，即dsDNA，dsRNA和DNA/RNA分子的粘性末端和平末端5'-P末端和3' -OH末端之間形成磷酸二酯鍵。
2. 修復dsDNA反應中的切口（Nick）。
3. 催化pyrophosphate 和ATP之間的磷酸交換反應（Weiss酶單位定義原理）
4. 需要ATP、Mg2+ 和DTT，zui佳pH為pH 7.5-8.0。
5. NaCl 濃度在200 mM以上時有抑制作用。
6. 1 %-10% PEG和150-200 mM NaCl能促進連接反應（尤其是平末端DNA）效率。
規格及成分：
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成分 |
200U |
1000U |
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T4 DNA 連接酶（5U/μL） |
40μl |
200μl |
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10×T4 連接酶Buffer |
300μl |
1.5ml |
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說明書 |
1份 |
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注意：本公司本產品的單位按Weiss 單位定義，200個Weiss單位相當于25000個連接單位，1000 個Weiss 單位相當于125000個連接單位。
保存條件：
低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
DNA片段和載體DNA的連接
1. 在微量離心管中制備下列連接反應液
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10×T4 DNA Ligase Buffer |
2.5 μl |
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自備插入DNA 片段 |
約0.3 pmol |
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自備載體DNA |
約0.03 pmol |
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T4 DNA Ligase |
1 μL |
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dH2O |
up to 25 μL |
2. 16℃過夜反應
3. 加入2.5 μL 的3 M 醋酸鈉（PH5.2）
4. 加入62.5 μL 的預冷無水乙醇，-20℃放置30-60 分鐘
5. 離心回收沉淀，用70%的預冷無水乙醇清洗沉淀，真空干燥
6. 25-50 μL TE 溶解，10-20 μL 轉化至100 μL 感受態細胞中。
