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腸桿菌的具體配置方法
發布時間：2017-09-06瀏覽次數：1615返回列表
腸桿菌的具體配置方法：
1.稱藥品
按實際用量計算后,按配方稱取各種藥品放入大燒杯中.牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量,用熱水溶解后倒入大燒杯;也可放在稱量紙上稱量,隨后放入熱水中,牛肉膏使與稱量紙分離,立即取出紙片.蛋白胨易吸潮,故稱量時要迅速.
2.加熱溶解
在燒杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉網上,小火加熱,并用玻棒攪拌,待藥品完全溶解后再補充水分至所需量.若配制固體培養基,則將稱好的瓊脂放入己溶解的藥品中,再加熱融化,此過程中,需不斷攪拌,以防瓊脂糊底或溢出,后補足所失的水分.
3. 調pH
檢測培養基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,邊加邊攪拌,并隨時用pH試紙檢測,直至達到所需pH范圍.若偏堿,則用lmol/L HCl進行調節.pH的調節通常放在加瓊脂之前.應注意pH值不要調過頭,以免回調而影響培養基內各離子的濃度.
4.過濾
液體培養基可用濾紙過濾,固體培養基可用4層紗布趁熱過濾,以利培養的觀察.但是供一般使用的培養基,這步可省略.
5.分裝
按實驗要求,可將配制的培養基分裝入試管或三角瓶內.分裝時可用漏斗以免使培養基沾在管口或瓶口上而造成污染. 分裝量:固體培養基約為試管高度的l/5,滅菌后制成斜面.分裝入三角瓶內以不超過其容積的一半為宜.半固體培養基以試管高度的1/3為宜,滅菌后垂直待凝.
6.加棉塞
試管口和三角瓶口塞上用普通棉花（非脫脂棉）制作的棉塞.棉塞的形狀,大小和松緊度要合適,四周緊貼管壁,不留縫隙,才能起到防止雜菌侵入和有利通氣的作用.要使棉塞總長約3/5塞入試管口或瓶口內,以防棉塞脫落.有些微生物需要更好的通氣,則可用8層紗布制成通氣塞.有時也可用試管帽或塑料塞代替棉塞.
7.包扎
加塞后,將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙或雙層報紙,以防滅菌時冷凝水沾濕棉塞.若培養基分裝于試管中,則應以5支或7支在一起,再于棉塞外包一層牛皮紙,用繩扎好.然后用記號筆注明,培養基名稱,組別,日期.
8.滅菌
將上述培養基于121.3℃濕熱滅菌20min.如因特殊情況不能及時滅菌,則應故人冰箱內暫存.
9.無菌檢查
將滅菌的培養基放入37℃溫箱中培養24～48h,無菌生長即可使用,或貯存于冰箱或清潔的櫥內,備用.
