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LAX細胞，復蘇細胞，LAX細胞現貨 常見問題及解決辦法：

1）對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當的提高培養基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細胞的狀態和生長速度。

2）對于生長不均的貼壁細胞：在培養過程中若出現細胞分布明顯不均時（即某一區域細胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白），此時可將細胞進行消化，重新打散，貼壁，加入新培養基進行培養。

3）細胞漂浮：培養瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養液培養觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

LAX細胞，復蘇細胞，LAX細胞現貨 之細胞消化不下來原因：

1）有可能是你的培養液沒有去除干凈，因為培養液可以中止消化。所以建議用PBS沖洗兩次。然后再加EDTA.

2）加大EDTA的濃度 ，可以選擇0.1％與trypsin混合使用，加大以上溶液的體積，可以用2ml。

3）37度溫度要夠。

4）實時查看，當看到鏡下細胞折光度有改變，就是有作用，然后用培養液將細胞沖洗下來。

5）用冰D-Hank's液洗細胞兩次；

6）用剛解凍的冷的胰酶（注意不要37度孵育）1-2ml/100ml的培養瓶，開過口的和時間長的都不用。

免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。

原理：

當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質x的抗體免疫沉淀x，那么與x在體內結合的蛋白質y也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。

優點：

（1）相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的，處于天然狀態；

（2）蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的，可以避免人為的影響；

（3）可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。

缺點：

（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；

（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；

（3）必須在實驗前預測目的蛋白是什么，以選擇后檢測的抗體，所以，若預測不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。

注意的問題：

（1）細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內存在的所有蛋白質－蛋白質相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或Triton X-100）。每種細胞的裂解條件是不一樣的，通過經驗確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS），細胞裂解液中要加各種酶抑制劑。

（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。

（3）使用對照抗體：

單克隆抗體：正常小鼠的IgG或另一類單抗

兔多克隆抗體：正常兔IgG

在免疫共沉淀實驗中要保證實驗結果的真實性，應注意以下幾點：

（1）確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發生。

（2）要確保抗體的特異性，即在不表達抗原的細胞溶解物中添加抗體后不會引起共沉淀。

（3）確定蛋白間的相互作用是發生在細胞中，而不是由于細胞的溶解才發生的，這需要進行蛋白質的定位來確定。

LAX細胞，復蘇細胞，LAX細胞現貨 細胞株狀態良好，飽滿，光澤度好，活力強，傳代次數少，價格優惠，詳細關于CHO-K1細胞價格|培養條件|來源|生長狀態|細胞形態|特征特性等致電：！

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Caco-2細胞，傳代細胞，Caco2細胞株 之角膜緣干細胞（原代培養）：

吸棄培養液

少量pbs將細胞洗一遍

棄之

0.1%姨酶：0.02%EDTA(1:1)混合液1ml將細胞表面過一遍，棄之

0.1%姨酶：0.02%EDTA(1:1)混合液1ml加入培養瓶，置培養箱3~5分鐘，看胞體變圓，用彎頭吸管吹打瓶壁黏附的細胞

加DMEM+20%FBS混合液1ml終止消化

800轉/分 離心 5分鐘

棄上清

離心管中加入1mlPBS,將細胞吹打起來

800轉/分 離心 5分鐘

棄上清

加入DMEM+20%FBS混合液1ml將細胞吹打起來

細胞懸液裝入培養瓶

置培養箱20分鐘

倒置顯微鏡下可見部分干擾的成纖維細胞貼壁

吸出細胞懸液1：2分裝新的培養瓶

注：加帶血清的培養基終止消化后再吹打容易起泡沫，影響操作，因此選擇邊消化邊吹打。消化完畢后，本人用胎盤蘭染色證實90%細胞存活，說明此操作合適。

有的客戶收到SERANA南美源胎牛血清問為什么血清那么紅，南美血清本身是很紅很紅，血一樣紅，我見過很多公司的南美血清是很紅，南美除了阿根廷之外，都是很紅的，并且血紅素也并不影響血清的質量。但是市面上有很多種仿貨并不紅，這就有問題了。如果一個客戶現在還說，南美血清為何這么紅的話，那老師有可能沒買過的南美血清國產血清是蠟黃色。北美血清的顏色就沒有這么紅，顏色很淡，淡黃至微紅。澳洲血清的血清介于南美和北美之間。更多血清小知識可以聯系我們公司張老師：！

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ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術要求，在檢測過程中除正常反應外，有時常見到一些錯誤的結果。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：①標本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。

1．樣品稀釋

酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應，如果血清不稀釋，不可避免會產生很強的非特異性反應，出現假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規定將血清稀釋至適當的倍數，以降低非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現出來。一般產品的樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定，以保證試驗的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴格按使用說明書操作，如某些產品應取10μl樣品進行稀釋，個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數不準確，檢測結果出現問題。

2．試劑盒平衡

試劑盒中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(約25℃)，一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠，樣品孵育時間相對縮短，ELISA反應不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。

3．樣品和試劑的混勻

稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗的均一性。

4．加樣

在現在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區，易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產生污染。出現氣泡則反應液界面有差異。所以，有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

5．溫育

溫育是ELISA測定中影響測定成敗為關鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結合反應在固相上進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結合，必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改變說明書操作，使用自己喜歡的溫育時間和溫育溫度，這樣造成一些不必要的麻煩。因為，不同試劑盒有不同的溫育時間和溫育溫度的選擇，隨意更改溫育時間或者溫育溫度將導致試驗結果出現偏差。

6．洗板

固相免疫測定技術是一種非均相免疫測定技術，需以洗滌操作將特異結合于固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分離開來，以保證ELISA測定的特異性。洗板對于ELISA測定來說，也是其關鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及時更換吸水紙，尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗結果。

7．邊緣效應

使用96孔板的ELISA測定中，常發現有“邊緣效應”，即外周孔顯色較中心孔深。經研究證實在溫育中的熱力學梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導體，在實驗室的常規ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學梯度。因此使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應”，并且可提高測定的重復性。

8．顯色

顯色一定要控制時間,根據試劑盒說明操作即可。一般來說，顯色時間過短，結果偏低；顯色時間過長，空白增高或者非特異性顯色增加。

9．比色

比色要注意波長的選擇。以TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用，而前者比色波長為450nm，后者為492nm，濾光片需根據要求隨時更換。因此，容易出現濾光片錯用的問題。

其次，單波長或雙波長比色選擇的問題。所謂的單波長比色即是通常的以對顯色具有zui大吸收的波長如450nm或492nm進行比色測定；而雙波長雙色則酶標儀在敏感波長如450nm和非敏感波長如630nm下各測定一次，敏感波上下的吸光度測定值為樣本測定酶反應特異顯色的吸光度與板孔上指紋、刮痕、灰塵等臟物所致的吸光度之和；非敏感波長下測定即改變波長至一定值，使得樣本測定酶反應特異顯色的吸光度值為零，此時測得的吸光度即為臟物的吸光度值。后酶標儀給出的數值為敏感波長下的吸光度值與非常感波長下的吸光度值的差。因此，雙波長比色測定具有能排除由微滴板本身、板孔內標本的非特異吸收、指紋、刮痕、灰塵等對特異顯色測定吸光度的影響的優點。由于ELISA測定中單個空白孔的非特異吸收上有一定程度的不確定性，也就是說每次測定或同次測定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度測定值，故而在ELISA測定比色時，是使用雙波長比色。

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suer LO2 人正常肝細胞

suer LoVo 人結腸癌細胞

suer LS-174-T 人結腸腺癌細胞

suer LTEP-A2 人肺腺癌

suer LX-2 人肝星形細胞

suer MA-104 恒河猴腎細胞

suer MC3T3-E1 小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14

suer MC3T3-E1 Subclone 14 小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14

suer MCF-10A 人正常乳腺上皮細胞

suer MCF7 人乳腺癌細胞

suer MDA-MB-231 人乳腺腺癌

suer MDA-MB-415 人乳腺腺癌細胞

suer MDA-MB-435 人乳腺癌高轉移細胞

suer MDA-MB-435S 人乳腺導管癌

suer MDA-MB-436 人乳腺腺癌細胞

suer MDA-MB-453 人乳腺癌細胞

suer MDA-MB-468 人乳腺癌細胞

suer MDBK (NBL-1) 牛腎細胞

suer MDCK 狗腎細胞

suer MDCK(NBL-2) 狗腎細胞

suer ME12 人前列腺癌

suer ME-180 人子宮頸表皮癌細胞

suer MEF 小鼠胚胎成纖維細胞

suer MFC 小鼠胃癌細胞

suer MG-63 人骨頭肉瘤細胞

suer MGC80-3 人胃癌細胞

suer MHCC97-H 高轉移人肝癌細胞

suer Miapaca2 人胰腺癌細胞

suer MKN-28 人胃癌細胞

suer MKN-45 人胃癌細胞

suer MLTC-1 小鼠睪丸間質細胞瘤細胞

suer MNK-7 人乳癌

suer MNNG/HOS Cl 人骨肉瘤細胞

suer MOLT-4 人急性淋巴母細胞白血病細胞

suer MR1 倉鼠X小鼠B淋巴細胞雜交瘤

suer MRC-5 人胚肺細胞

suer MS1 小鼠胰島內皮細胞

suer MS751 人子宮頸表皮癌細胞

suer MSTO-211H 人肺癌細胞株

suer Mv.1.Lu(NBL-7) 貂肺上皮細胞

suer NAMALWA 人Burkitt's淋巴瘤細胞

suer NCI-H1299 人非小細胞肺癌細胞

suer NCI-H1395 人肺腺癌細胞

suer NCI-H1650 人非小細胞肺癌細胞

suer NCI-H1975 人肺腺癌細胞

suer NCI-H2452 人間皮瘤細胞

suer NCI-H292 人肺癌細胞(淋巴結轉移)

suer NCI-H358 人非小細胞肺癌細胞

suer NCI-H446 人小細胞肺癌細胞

suer NCI-H460 人大細胞肺癌細胞

suer NCI-H661 人大細胞肺癌細胞

suer NCI-H716 人結直腸腺癌細胞

suer NCI-N87 人胃癌細胞

suer NCTC clone 929 小鼠成纖維細胞

suer Neuro-2a 小鼠腦神經瘤細胞

suer NIH/3T3 小鼠胚胎細胞

suer NIH-3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細胞(前脂肪)

suer NIT-1β 小鼠胰島素瘤β細胞

suer NP69 人永生化鼻咽上皮細胞系

suer NR8383 大鼠肺泡巨噬細胞

suer NRC-5 人胚肺

suer NRK 大鼠腎細胞

suer NRK-52E 大鼠腎細胞

suer OC3 人卵巢癌細胞株

suer OK 負鼠腎細胞

suer OKT 11 雜交瘤細胞抗CD2

suer OKT 3 雜交瘤(抗CD3)

suer OP9 小鼠骨髓基質細胞

suer OS-RC-2 人腎癌細胞

suer OV56 人卵巢癌細胞

suer OV90 人卵巢癌細胞

suer OVCAR3 人卵巢癌細胞

suer OVCAR4 人卵巢癌細胞

suer OVISE 人卵巢癌細胞

suer OVSAHO 人卵巢癌細胞

suer OVTOKO 人卵巢癌細胞

suer P19 小鼠畸胎瘤細胞

suer P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1] 小鼠骨髓瘤細胞

suer P388 小鼠淋巴樣瘤

suer P388D1 小鼠淋巴樣瘤細胞

suer P3X63Ag8 小鼠骨髓瘤細胞

suer P3X63Ag8.653 小鼠骨髓瘤細胞

suer p69 前列腺癌

suer P815 小鼠肥大細胞

suer PA317 小鼠胚胎成纖維細胞

suer PANC-1 人胰腺癌細胞

suer PC 61 5.3 [PC 61; PC 61.5.3] 雜交瘤細胞CD25

suer PC-12 大鼠嗜鉻細胞瘤

suer PC-12(低分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化)

suer PC-12(高分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)

suer PC-12(未分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化)

suer PC-13 人前列腺癌

suer PC-3 人前列腺

suer Phix-293T 人胚腎細胞(Ad5DNA化)

suer PIEC 豬髖動脈內皮細胞

suer PK136 小鼠X小鼠

suer PK-15 豬腎細胞

suer PLC/PRF/5 人肝癌亞力山大細胞

suer Psi2 DAP 小鼠胚胎成纖維細胞

suer PSN1 人胰腺癌細胞

suer Pt K1 (NBL-3) 袋鼠腎細胞

suer QCY-7703 人肝癌細胞

suer QGY-7701 人肝癌細胞

suer QGY-7703 人肝癌

suer QGY-Q3* 人肝癌

suer R 1610 倉鼠肺細胞

suer R15 大鼠肝癌

suer RAG 小鼠腎腺癌細胞

suer Raji 人Burkitt's淋巴瘤細胞

suer RAW264.7 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

suer RBE 人肝膽管癌細胞

suer RBL-2H3 大鼠嗜堿性細胞白血病細胞

suer RD 人惡性胚胎橫紋肌瘤細胞

suer Reh 人急性非B非T淋巴細胞白血病

suer Renca 小鼠腎癌細胞

suer RF/6A 猴脈絡膜-視網膜(內皮)細胞

suer RH-35 大鼠肝癌細胞

suer RIN-m 褐鼠胰島素瘤上皮細胞

suer RKO 人結腸腺癌細胞

suer RKO-AS45-1 人結腸癌轉基因細胞

suer RKO-E6 人結腸癌轉基因細胞

suer RL95-2 人子宮內膜癌細胞

suer RM-1 小鼠前列腺癌細胞

suer RSC96 大鼠雪旺細胞

suer RT4 人膀胱移行細胞乳頭瘤細胞

suer RWPE-1 人正常前列腺上皮細胞

suer rwpe2 人前列腺正常細胞

suer S-180 小鼠腹水瘤細胞

suer Saos-2 人成骨肉瘤細胞

suer ScaBER 人膀胱鱗癌

suer SCC-25 人舌癌細胞

suer SF-268 人神經癌細胞

suer SF-295 人XG惡性膠質瘤細胞

suer SGC7901 人胃腺癌細胞

suer SHG-44 腦膠質瘤

suer SH-SY5Y 人神經母細胞瘤細胞

suer SHZ-88 大鼠乳腺癌細胞

suer SiHa 人子宮頸鱗癌細胞

suer SK-BR-3 人乳腺癌細胞

suer SK-HEP-1 人肝癌細胞

suer SK-MES 人肺鱗癌細胞

suer SK-MES-1 人肺鱗癌細胞

suer SKMG4 人膠質瘤細胞

suer SK-N-BE(2) 人神經母細胞瘤細胞

suer SK-NEP-1 人腎母細胞瘤細胞

suer SK-N-SH 人神經母細胞瘤細胞

suer SK-OV-3 人卵巢癌細胞

suer SKRC39 人腎乳頭狀細胞癌細胞

suer SMMC-7721 人肝癌細胞

suer SP2/0 小鼠骨髓瘤細胞

suer SPC-A-1 人肺腺癌細胞

suer SUNE1 人鼻咽癌細胞

suer SUP-B15 人Ph+急淋白血病細胞系

suer Super Tube 狗腎細胞

suer SV40 MES 13 小鼠腎小球系膜細胞

suer SV-HUC-1 人輸尿管上皮永生化細胞

suer SW 1353 人軟骨肉瘤細胞

suer SW 780 人膀胱移行細胞癌

suer SW 982 人滑膜肉瘤細胞

suer SW038-C2 人腦膠質母細胞瘤細胞

suer SW1116 人結腸癌細

suer SW-13 人腎上腺皮質小細胞癌細胞

suer SW-1573 人非小細胞肺癌

suer SW1990 人胰腺癌細胞

suer SW403 人結腸癌細胞

suer SW480 人結腸腺癌細胞

suer SW579 人甲狀腺鱗癌細胞

suer SW620 人結腸癌細胞

suer SW626 人卵巢癌細胞

suer T-24 人膀胱移行細胞癌細

suer T47-D 乳腺管癌

suer PC-9 人肺腺癌細胞

suer T84 人結腸腺癌肺轉移細胞

suer Tca-8113 人舌鱗癌細胞

suer TE-1 人食管癌細胞

suer THP-1 單核細胞瘤

suer TM3 小鼠睪丸間質細胞

suer TOV-112D 人卵巢癌細胞

suer TOV-21G 人卵巢癌細胞

suer TSCCA 人舌鱗癌細胞

suer TT 人甲狀腺導管癌細胞

suer U-118 MG 人腦星形膠質母細胞瘤

suer U-2 OS 人骨肉瘤細胞

suer U226 人骨髓瘤細胞

suer U251 人腦星形膠質瘤細胞

suer U266 骨髓瘤細胞株

suer U87 人腦膠質瘤細胞

suer U-87 MG 人腦星形膠質母細胞瘤

suer U937 人組織細胞淋巴瘤細胞

suer UMNSAH/DF-1 雞胚成纖維細胞

suer UMR-106 大鼠骨肉瘤細胞

suer UM-UC-3 人膀胱移行細胞癌

suer V79 倉鼠肺細胞

suer VERO 非洲綠猴腎細胞

suer VX2 兔肝癌細胞

suer Walker-256 大鼠肝癌細胞

suer WERI-Rb-1 人視網膜神經膠質瘤細胞

suer WI-38 人胚肺細胞

suer WiDr 人大腸癌細胞

suer WISH 人羊膜細胞

suer WPMY-1 人正常前列腺基質永生化細胞

suer Y1 小鼠腎上腺皮質瘤細胞

suer Y3-Ag 1.2.3 大鼠骨髓瘤細胞

suer Yac-1 小鼠淋巴瘤細胞

suer ZR-75-1 人乳腺癌細胞

suer ZR-75-30 人乳腺癌細胞