GIK細(xì)胞，草魚腎細(xì)胞培養(yǎng)說明書
發(fā)布時(shí)間：2015-11-06瀏覽次數(shù)：1318返回列表
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細(xì)胞名稱 |
草魚腎細(xì)胞； GIK |
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種屬 |
草魚 |
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生長(zhǎng)狀態(tài) |
貼壁生長(zhǎng) |
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培養(yǎng)條件 |
培養(yǎng)基類型：RPMI 1640培養(yǎng)基 FBS（Gibco16000044）: 10% 抗生素：雙抗 培養(yǎng)條件：37℃，CO2: 5% |
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傳代方法 |
收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)： 如果沒長(zhǎng)滿，將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺(tái)內(nèi)更換新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。 如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿（約80%-90%）則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。 貼壁細(xì)胞傳代方法： 1 棄去培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。 2 加1ml 0.25%的胰酶（含0.02%EDTA），讓胰酶與大部分細(xì)胞接觸后放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，隨時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)變化，待細(xì)胞大部分變圓后加完全培養(yǎng)基終止消化。 懸浮細(xì)胞傳代方法：可以直接傳代也可以離心法傳代。 1 直接傳代是讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3，吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。 2離心法傳代是將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)， 1000rpm，5分鐘，去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。 一般沒有特殊說明，細(xì)胞一般是一傳二。 |
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凍存方法 |
70% 完全培養(yǎng)基，20%FBS，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 儲(chǔ)存：液氮中長(zhǎng)期保存。 |
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注 |
1 觀察細(xì)胞在低倍鏡下觀察，便于整體估計(jì)細(xì)胞密度。 2 在運(yùn)輸過程中可能會(huì)導(dǎo)致一些貼壁不牢的細(xì)胞發(fā)生部分脫落，可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。 3 收到細(xì)胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細(xì)胞污染等，請(qǐng)拍照并在三天內(nèi)與我們聯(lián)系。 |
