HEPES緩沖液使用方法注意
發(fā)布時間：2015-09-15瀏覽次數(shù)：1076返回列表
在細胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常少不了HEPES緩沖液。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢，在開放式的培養(yǎng)條件中，若加入HEPES，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右。 HEPES分子量為238.31，化學名：4-羥乙基哌嗪乙磺酸，分子式: C8H18N2O4S。 HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。
HEPES使用方法有兩種：
(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中，再過濾除菌。每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 調(diào)pH至7.2，濾過除菌后使用。此時HEPES的使用濃度為10 mmol/L。
(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L)，使用前取 99ml培養(yǎng)液加入 lml貯存液，終應用濃度仍為10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中，用lN NaOH調(diào)pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，過濾除菌，分裝小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。
需要注意的是，HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L，對細胞性作用。一般情況下，濃度為20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力。現(xiàn)在市售HEPES為約10g包裝的小瓶，大家根據(jù)實際情況正確靈活配制就OK了
