細胞養(yǎng)不好必看——培養(yǎng)細胞小技巧
發(fā)布時間：2019-05-17瀏覽次數(shù)：1021返回列表
聽說同學(xué)們的養(yǎng)的細胞常常因為各種原因一再受損或者死亡，今天小秋拿出畢生功力，為大家講述細胞培養(yǎng)中那些你可能忽略的小細節(jié)
細胞的營養(yǎng)來源
針對大多數(shù)腫瘤細胞，營養(yǎng)配方一般為：90%合成培養(yǎng)基(DMEM、RPMI1640、MEM等)和10%胎牛血清(FBS);為了防止污染，可以加1%雙抗!
常見問題解答：
Q：針對不同細胞，細胞培養(yǎng)基配方一樣嗎?如何獲知呢?
A：不同細胞的培養(yǎng)基是不同的。在小秋家購買的細胞，針對不同細胞株，會有詳細介紹，包括生長的狀態(tài)圖、培養(yǎng)基的類型等。
Q：培養(yǎng)基為什么一般都是偏紅色?
A：因為培養(yǎng)基加了酚紅來顯示顏色，指示pH范圍為6-8，顏色會由黃變?yōu)樽霞t。這是為了我們能更直觀觀察培養(yǎng)液的變化，如變黃，則代表偏酸，偏堿性了就顯示偏紫色。一般來說，細胞吸收營養(yǎng)后，變黃后就暗示我們要換培養(yǎng)基啦!所以密切觀察很重要哦!
Q：大多數(shù)細胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長，那可以替換嗎?
A：不建議更換的培養(yǎng)基，因為當培養(yǎng)基改變時，細胞的性質(zhì)可能也會變化。
Q：若是細胞生長緩慢，是否可以增加血清比例?
A：可以!
細胞的生長環(huán)境舒適無菌的環(huán)境是細胞健康成長的基礎(chǔ)。如下圖為培養(yǎng)細胞的器皿，包括形狀、規(guī)格、用途多樣的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿及培養(yǎng)板。zui終住進37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱。常見問題解答：
Q：細胞培養(yǎng)板規(guī)格不一，如何正確選用?
A：根據(jù)不同規(guī)格的細胞培養(yǎng)皿/板容量及用途，如流式一般用 6 孔，爬片一般用 24 孔，MTT 一般用 96 孔等。
Q：細胞培養(yǎng)皿和培養(yǎng)瓶區(qū)別?
A：就細胞培養(yǎng)狀態(tài)來說，培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿沒有太大區(qū)別，主要在于安全系數(shù)(培養(yǎng)瓶>培養(yǎng)皿)、培養(yǎng)細胞數(shù)量(大培養(yǎng)瓶>培養(yǎng)皿)。但是培養(yǎng)瓶成本也會相對較高，因此無特殊要求，一般選擇培養(yǎng)皿即可。
細胞的復(fù)蘇與凍存
細胞復(fù)蘇：指將凍存的細胞解凍之后重新培養(yǎng)，細胞恢復(fù)生長的過程。復(fù)蘇過程如下圖所示：
常見問題解答：Q：為什么細胞復(fù)蘇后，很多難以貼壁?
A：忽略培養(yǎng)基的問題，主要考慮細胞凍存時狀態(tài)差或者復(fù)蘇時動作太慢導(dǎo)致細胞死亡。切記zui重要的融化速度要快，可不時搖動冷凍管，使之盡快通過zui易受損的溫度段(-5～0℃)。Q：為什么細胞貼壁了，卻長不起來?
A：此時需要考慮的是細胞密度問題，一些細胞傾向于維持一定的密度，若復(fù)蘇的細胞生長緩慢，可將細胞轉(zhuǎn)移到較小的培養(yǎng)瓶/皿中培養(yǎng)。
細胞凍存：將細胞放在低溫環(huán)境(-70℃~-196℃)，細胞內(nèi)的代謝降低，可zui大限度的保存細胞活力，以便長期儲存。
常見問題解答：
Q：目前細胞凍存液多采用的什么配方?
A：目前細胞凍存液的配方有很多種，如培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1或8：1：1或5：4：1，或直接用血清：DMSO=9:1。 這里小秋推薦使用HAKATA無血清細胞凍存液，無需程序降溫，細胞存活率和活力高達90%-98%，適用于干細胞凍存及無血清培養(yǎng)細胞。
Q：若沒有細胞凍存盒，我們該怎么辦?
A：可先將凍存管放入4℃冰箱中10min，再移至-20℃冰箱30min，-80℃冰箱2h或過夜，zui后放入液氮罐內(nèi)。為了節(jié)約時間，還可直接在凍存盒外包裹一團棉花，用棉花代替凍存盒緩慢降溫的特點，將細胞轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜，再轉(zhuǎn)移至液氮保存。
Q：細胞凍存時對細胞量有要求嗎?
A：細胞復(fù)蘇時會有一定的細胞死亡，因此細胞的濃度應(yīng)足夠高，起始濃度106—107個/ml/管;
今天的內(nèi)容就到這里了，細胞培養(yǎng)中的細節(jié)可馬虎不得，希望大家可以結(jié)合這些小技巧，將細胞養(yǎng)的更漂亮！
