GIBCO胎牛血清的操作步驟與保存要點
發布時間：2019-03-22瀏覽次數：1028返回列表
GIBCO胎牛血清用于廣泛的細胞類型，特別是敏感的細胞系，血清中內毒素和血紅蛋白水平zui低?內毒素水平：≤ 10 EU/ml?血紅蛋白水平：≤ 10 毫克/分升?三過濾0.1μM。是從適合人類衛生習慣的農場收集的。有時，也可能用其他的牛血清，如新生牛血清或者供體牛血清。在細胞培養中，血清供應了豐富的高分子蛋白，低分子量營養物，疏水載體蛋白和其他體外細胞生長必要的成分如激素和粘附因子。同時，血清可以增加培養基的緩沖能力或中和有毒成分，起到保護細胞的作用。
在胎牛血清生產過程中，全血使用無菌一次性塑料袋收集，待凝結后分離，收集和冷凍儲存血清。控制胎牛血清的初始收集是控制zui終血清產品質量的關鍵因素。只有初始原料符合我們的規范時才能允許生產。
2、血清原料
在市場存在兩個胎牛血清標準:美國農業部標準（USDA）和歐洲標準。美國農業部標準，原始血清必須采自未發生瘋牛病（BSE）和口蹄疫（FMD）疫情的，才可自由進口到任何，用于安全生產。而且研究者只有使用符合這種標準的血清，才被允許將其細胞和細胞產品送至其他同樣有嚴格進口條款的，進行合作交流。
3、處理過程
優選數個批次凍存血清進行解凍，檢驗其內毒素和血紅素的含量，滿足標準的才能在冷藏條件下充分混合繼續加工，進一步進行過濾除菌。NQBB依次通過預過濾和膜過濾來處理胎牛血清。zui后的過濾步驟為連續三次用100nm的濾膜過濾。過濾結束，血清采用無菌工藝進行分裝，整個過程有效確保zui終產品無菌。血清生產的空氣潔凈度為100級。所有分裝工作臺都通過微粒空氣過濾器過濾，并保持正壓分裝環境，對總微粒、懸浮微粒數和壓力進行監控。分裝后，終產品迅速-20度凍存，并隔離，直到所有的質量控制檢測完成。
4、FBS質量控制
每批胎牛血清檢測確認符合各項標準，并以書面的方式記錄在質檢報告中。
5、質量保證
胎牛血清生產過程在一個嚴格控制的條件下進行。紫外線滅菌，過濾除菌和分裝是關鍵生產環節，可以確保血清的品質。與血清生產相關的數據作為專門的檔案記錄，從初步采集的原料到成品儲存的整個生產過程，以及質量控制檢測和結果都有備案，并可以在監控條件下追溯源文件。 胎牛血清生產過程遵循歐洲議會關于體外診斷的標準。
2、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點":經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清。
3、切勿將血清在37放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質量保存/運輸：-5°C～-20°C。
4、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20 至 -70 低溫冰箱中的血清放入4冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡）,使溫度與成分均一，減少沉淀的發生。切勿直接將血清從-20進入37解凍,這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝集而出現沉淀。
5、需要長期保存的血清必須儲存于-20 - 70 低溫冰箱中。4冰箱中保存時間切勿超過1個月。由于血清結冰時體積會增加約10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間，否則易發生污染或玻璃瓶凍裂。
6、一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發現血清有懸浮物，則可將GIBCO胎牛血清加入培養液內一起過濾，切勿直接過濾血清。
一、GIBCO胎牛血清的操作步驟
1、采集在胎牛血清生產過程中，全血使用無菌一次性塑料袋收集，待凝結后分離，收集和冷凍儲存血清。控制胎牛血清的初始收集是控制zui終血清產品質量的關鍵因素。只有初始原料符合我們的規范時才能允許生產。
2、血清原料
在市場存在兩個胎牛血清標準:美國農業部標準（USDA）和歐洲標準。美國農業部標準，原始血清必須采自未發生瘋牛病（BSE）和口蹄疫（FMD）疫情的，才可自由進口到任何，用于安全生產。而且研究者只有使用符合這種標準的血清，才被允許將其細胞和細胞產品送至其他同樣有嚴格進口條款的，進行合作交流。
3、處理過程
優選數個批次凍存血清進行解凍，檢驗其內毒素和血紅素的含量，滿足標準的才能在冷藏條件下充分混合繼續加工，進一步進行過濾除菌。NQBB依次通過預過濾和膜過濾來處理胎牛血清。zui后的過濾步驟為連續三次用100nm的濾膜過濾。過濾結束，血清采用無菌工藝進行分裝，整個過程有效確保zui終產品無菌。血清生產的空氣潔凈度為100級。所有分裝工作臺都通過微粒空氣過濾器過濾，并保持正壓分裝環境，對總微粒、懸浮微粒數和壓力進行監控。分裝后，終產品迅速-20度凍存，并隔離，直到所有的質量控制檢測完成。
4、FBS質量控制
每批胎牛血清檢測確認符合各項標準，并以書面的方式記錄在質檢報告中。
5、質量保證
胎牛血清生產過程在一個嚴格控制的條件下進行。紫外線滅菌，過濾除菌和分裝是關鍵生產環節，可以確保血清的品質。與血清生產相關的數據作為專門的檔案記錄，從初步采集的原料到成品儲存的整個生產過程，以及質量控制檢測和結果都有備案，并可以在監控條件下追溯源文件。 胎牛血清生產過程遵循歐洲議會關于體外診斷的標準。
二、GIBCO胎牛血清的保存要點
1、熱滅活是指56, 30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補體成分（complement）滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化。2、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點":經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清。
3、切勿將血清在37放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質量保存/運輸：-5°C～-20°C。
4、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20 至 -70 低溫冰箱中的血清放入4冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡）,使溫度與成分均一，減少沉淀的發生。切勿直接將血清從-20進入37解凍,這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝集而出現沉淀。
5、需要長期保存的血清必須儲存于-20 - 70 低溫冰箱中。4冰箱中保存時間切勿超過1個月。由于血清結冰時體積會增加約10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間，否則易發生污染或玻璃瓶凍裂。
6、一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發現血清有懸浮物，則可將GIBCO胎牛血清加入培養液內一起過濾，切勿直接過濾血清。
