小鼠ELISA試劑盒試驗操作中可能影響結果的原因與處理方法
發布時間：2018-12-17瀏覽次數：1127返回列表
小鼠ELISA試劑盒利用雙抗夾心法，在96孔板中預包被了小鼠胰島素蛋白的單克隆抗體，將標準品，質控品，以及樣品加入到96孔板中孵育結合，經過洗滌，再加入 HRP-偶聯的胰島素多克隆抗體進行孵育，在加入TMB底物，HRP與底物反應產生有色產物。吸光值越高，對應樣品中胰島素含量越多。
小鼠ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。下面分析小鼠ELISA試劑盒試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的處理方法。
一、選擇試劑
選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、加樣
可能原因：
1、血清或血漿標本分離不好即進行加樣；
2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)；
3、加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法：
1、標本為血清：zui好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
2、加樣后及時放入孵箱。
3、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4、如果采用AT或其他全自動加樣，zui好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5、標本較多時，請分批操作。
三、 孵育
可能原因：
1、孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附于孔壁，難于清洗徹底；
2、孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。
解決辦法：
1、貼封片或加蓋；
2、按說明步驟嚴格控制操作時間。
四、洗板
ELISA試劑盒可能原因：
1、采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。
2、采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。
3、反應板過多造成洗板等待時間長。
解決辦法：
1、保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后zui好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2、合理安排，或多用幾臺洗板機。
五、顯色
可能原因：
1、顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
2、加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
解決辦法：
1、顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；
2、加樣時保持顯色劑不外流；
3、A、B液應避免接觸金屬器械。
六、終止
可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
七、讀板
如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸； 盡可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。
小鼠ELISA試劑盒在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
小鼠ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。下面分析小鼠ELISA試劑盒試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的處理方法。
一、選擇試劑
選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、加樣
可能原因：
1、血清或血漿標本分離不好即進行加樣；
2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)；
3、加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法：
1、標本為血清：zui好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
2、加樣后及時放入孵箱。
3、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4、如果采用AT或其他全自動加樣，zui好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5、標本較多時，請分批操作。
三、 孵育
可能原因：
1、孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附于孔壁，難于清洗徹底；
2、孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。
解決辦法：
1、貼封片或加蓋；
2、按說明步驟嚴格控制操作時間。
四、洗板
ELISA試劑盒可能原因：
1、采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。
2、采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。
3、反應板過多造成洗板等待時間長。
解決辦法：
1、保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后zui好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
2、合理安排，或多用幾臺洗板機。
五、顯色
可能原因：
1、顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
2、加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
解決辦法：
1、顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；
2、加樣時保持顯色劑不外流；
3、A、B液應避免接觸金屬器械。
六、終止
可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
七、讀板
如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸； 盡可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。
小鼠ELISA試劑盒在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
