豬ELISA試劑盒試驗時的具體步驟
發(fā)布時間：2018-03-14瀏覽次數(shù)：1032返回列表
豬ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被豬基質(zhì)金屬蛋白酶1（MMP-1）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬基質(zhì)金屬蛋白酶1（MMP-1）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
豬ELISA試劑盒試驗時的具體步驟如下：
1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2、設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3、樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4、除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7、每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
豬ELISA試劑盒試驗時的具體步驟如下：
1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2、設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3、樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4、除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7、每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
