細胞培養方方法及預防污染的方法
發布時間：2024-03-18瀏覽次數：879返回列表
細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。不論對于整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，細胞培養都是一個必不可少的過程，細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。
細胞培養是指從體內組織取出細胞膜，模擬體內生存環境，在無菌、適當溫度及酸堿度和一定營養條件下，使其生長繁殖并維持結構和功能的一種培養技術。目前細胞培養方式主要包括以下三種：
1、貼壁培養
貼壁培養主要適用于貼壁依賴性細胞。此類需要相互依賴，需貼附于不起化學作用的物質（玻璃或塑料等無活性物質）的表面生長、生存和維持，并終在附著面生長至單層，鋪滿平面時便會發生接觸抑制。大多數動物細胞，包括非淋巴組織的細胞和許多異倍體體系的細胞屬于這一類型，他們需要附著于適量正電荷的固體或半固體的表面勝仗。
2、懸浮培養
來源于血液、淋巴組織的細胞，及許多腫瘤細胞（包括雜交瘤細胞）和某些轉化細胞等屬于懸浮培養型細胞，細胞為非貼壁依賴性細胞，無需支撐面，細胞或細胞聚集體懸浮于液體培養基中增殖。懸浮培養是大規模細胞培養的理想方式，可采用類似于微生物的方法進行懸浮培養。
3、固定化培養
動物細胞較微生物脆弱，易受剪切力等的影響，而細胞固定化技術可較好的保護細胞免受機械力及環境變化的影響，提高細胞的耐受力，促使細胞高密度培養，提高目的產物的產率。在傳統的固定化酶技術中，常采用戊2醛、聚丙烯酰胺、聚氨酯等作為固定化細胞載體。但在動物細胞培養中，一般使用較溫和的固定方法，如吸附、包埋、中空纖維或膠囊化等，具有剪切力低、傳遞和抗污染能力強、細胞生長密度高、產物易于收集和分離純化等特點。
由于所培養的細胞的不同，固定化培養的方式也有不同，一般對于貼壁依賴性細胞通常采用膠原包埋，而對于非貼壁依賴性細胞則常用海藻酸鈣包埋。常用的細胞固定化的方法主要有吸附、共價貼附、離子/共價交聯、包埋和微囊化等。
防止細胞培養出現污染的方法如下：
1、從培養箱取放細胞前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開門時間和減少開門次數。培養瓶放入培養箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發后再放入，以免培養箱內滯留過多乙醇蒸氣。
2、操作的時候防護服、口罩、手套缺一不可。操作前，準備好所有實驗所需物品，以減少走動，物品需有序擺放在超凈臺觸手可及的地方，同時空留足夠操作空間。
3、操作時，試劑不用盡量及時蓋上蓋子，移至操作區外圍，盡量不要從開口容器上經過。
4、使用移液槍時，將容器傾斜以便于移液，切勿將槍桿碰觸瓶口及內壁。一旦發生倒吸情況，要及時用酒精棉球擦拭，以免液體殘留導致細菌滋生。
5、凍存細胞時凍存管蓋子需擰緊。復蘇細胞時，從液氮罐取出凍存管，輕擰蓋子，以確認蓋子是否擰緊。
細胞培養是指從體內組織取出細胞膜，模擬體內生存環境，在無菌、適當溫度及酸堿度和一定營養條件下，使其生長繁殖并維持結構和功能的一種培養技術。目前細胞培養方式主要包括以下三種：
1、貼壁培養
貼壁培養主要適用于貼壁依賴性細胞。此類需要相互依賴，需貼附于不起化學作用的物質（玻璃或塑料等無活性物質）的表面生長、生存和維持，并終在附著面生長至單層，鋪滿平面時便會發生接觸抑制。大多數動物細胞，包括非淋巴組織的細胞和許多異倍體體系的細胞屬于這一類型，他們需要附著于適量正電荷的固體或半固體的表面勝仗。
2、懸浮培養
來源于血液、淋巴組織的細胞，及許多腫瘤細胞（包括雜交瘤細胞）和某些轉化細胞等屬于懸浮培養型細胞，細胞為非貼壁依賴性細胞，無需支撐面，細胞或細胞聚集體懸浮于液體培養基中增殖。懸浮培養是大規模細胞培養的理想方式，可采用類似于微生物的方法進行懸浮培養。
3、固定化培養
動物細胞較微生物脆弱，易受剪切力等的影響，而細胞固定化技術可較好的保護細胞免受機械力及環境變化的影響，提高細胞的耐受力，促使細胞高密度培養，提高目的產物的產率。在傳統的固定化酶技術中，常采用戊2醛、聚丙烯酰胺、聚氨酯等作為固定化細胞載體。但在動物細胞培養中，一般使用較溫和的固定方法，如吸附、包埋、中空纖維或膠囊化等，具有剪切力低、傳遞和抗污染能力強、細胞生長密度高、產物易于收集和分離純化等特點。
由于所培養的細胞的不同，固定化培養的方式也有不同，一般對于貼壁依賴性細胞通常采用膠原包埋，而對于非貼壁依賴性細胞則常用海藻酸鈣包埋。常用的細胞固定化的方法主要有吸附、共價貼附、離子/共價交聯、包埋和微囊化等。
防止細胞培養出現污染的方法如下：
1、從培養箱取放細胞前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開門時間和減少開門次數。培養瓶放入培養箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發后再放入，以免培養箱內滯留過多乙醇蒸氣。
2、操作的時候防護服、口罩、手套缺一不可。操作前，準備好所有實驗所需物品，以減少走動，物品需有序擺放在超凈臺觸手可及的地方，同時空留足夠操作空間。
3、操作時，試劑不用盡量及時蓋上蓋子，移至操作區外圍，盡量不要從開口容器上經過。
4、使用移液槍時，將容器傾斜以便于移液，切勿將槍桿碰觸瓶口及內壁。一旦發生倒吸情況，要及時用酒精棉球擦拭，以免液體殘留導致細菌滋生。
5、凍存細胞時凍存管蓋子需擰緊。復蘇細胞時，從液氮罐取出凍存管，輕擰蓋子，以確認蓋子是否擰緊。
