細胞的復蘇具體操作及易犯錯誤
發布時間：2023-09-11瀏覽次數：816返回列表
細胞復蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。
具體操作:
1、實驗前準備：
1）.將水浴鍋預熱至37℃
2）.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等等。
2、取出凍存管：
1）.根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
2）.從液氮罐中取出細胞盒，取出所需的細胞，同時核對管外的編號。
3、迅速解凍：
1）.迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。
2）.約1-2min后凍存管內液體完全溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內。
4、平衡離心：
用架盤天平平衡后，放入離心機中3000r/min離心3min
5、制備細胞懸液：
1）.吸棄上清液。
2）.向離心管內加入10ml培養液，吹打制成細胞懸液。
6、細胞計數：
細胞濃度以5×105/ml為宜。
7、培養細胞
將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內，將培養瓶放入37℃和5％CO2的培養箱內2-4小時（或者24-48小時）后換液繼續培養培養，換液的時間由細胞情況而定。
易犯錯誤：
1)、水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。
2）、水浴鍋內凍存管太多，導致傳熱不佳，使融化時間延長。
3）、離心前忘記平衡，導致離心機損壞和細胞丟失。
4）、一次復蘇細胞過多，忘記換吸頭和吸管，導致細胞交叉污染。
