ELISA實驗洗板必看關鍵操作
發布時間：2023-04-11瀏覽次數：939返回列表
做ELISA實驗時，洗板有兩種方法：手工法洗板和洗板機洗板。二者沒有本質的差別,只要操作合乎要求, 均能得到正確、可靠的結果。
手工洗板是每次反應溫育后,將反應液吸出或甩干,然后在板孔中加滿洗液,放置2～3 min后,將洗液吸出或甩干再在吸水紙上拍干。重復上述洗滌步驟3～4次,后在吸水紙上拍干即可。手工洗板人為因素比較大,實驗人員必須經驗豐富,洗滌次數要足夠,沖擊力又不要太大,加入的洗液量以剛滿反應孔為限,防止孔口內有游離酶未能洗凈,同時防止孔與孔之間液體交叉。洗滌結束后扣干亦非常重要,否則易造成假陽性。每次洗完板后,在吸水紙上輕輕拍干,拍板時要垂直,避免交叉感染。用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;吸水紙要一次性使用,應使用不易脫落碎屑的吸水紙為宜。酶結合物不耐干燥,特別在較高的溫度下易失活,所以拍干的反應板應盡量縮短在空氣中暴露的時間,時間越長,吸光度值越低。
洗板機洗板是將手工操作改由洗板機進行,人為因素少,速度快,條件恒定,但是使用洗板機洗板的一個特點是,每次洗板后不能拍干,故有較多的液體殘留,需增加洗板次數來減少這種誤差。洗板機洗板次數越少,假陽性越高,本實驗中,洗板1次,假陽性率高達90%;洗板2次,假陽性率為38%;洗板3次,假陽性率為2%;洗板4～5次,未出現假陽性。洗板次數并非越多越好,太多不但浪費人力、物力,并且也會導致假陰性結果,所以一般試劑盒要求洗板4～5次即可。洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出。為了洗滌效果較好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1～2次,能達到理想的洗滌效果。
