細(xì)胞劃痕試驗(yàn)必看要點(diǎn)
發(fā)布時(shí)間：2021-11-16瀏覽次數(shù)：1000返回列表
傷口愈合試驗(yàn)，也通常稱(chēng)為“劃痕試驗(yàn)”，是一種廣泛建立的研究體外集體細(xì)胞遷移的技術(shù)。細(xì)胞劃痕（Wound Healing)是一種操作簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。其實(shí)驗(yàn)原理是，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域，稱(chēng)為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。
條件好的實(shí)驗(yàn)室可以使用活細(xì)胞成像來(lái)分析創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)中角質(zhì)形成細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移活動(dòng)。結(jié)合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時(shí)間的速度。使用延時(shí)顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點(diǎn)是，可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。
通常，用于傷口愈合試驗(yàn)的細(xì)胞類(lèi)型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細(xì)胞系和原代細(xì)胞經(jīng)常被用作這方面的模型。蕞常用的細(xì)胞類(lèi)型是角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。
條件好的實(shí)驗(yàn)室可以使用活細(xì)胞成像來(lái)分析創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)中角質(zhì)形成細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移活動(dòng)。結(jié)合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時(shí)間的速度。使用延時(shí)顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點(diǎn)是，可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。
通常，用于傷口愈合試驗(yàn)的細(xì)胞類(lèi)型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細(xì)胞系和原代細(xì)胞經(jīng)常被用作這方面的模型。蕞常用的細(xì)胞類(lèi)型是角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。
那么制作劃痕實(shí)驗(yàn)需要注意事項(xiàng)：
1. 細(xì)胞的密度；劃痕實(shí)驗(yàn)一般是幾種細(xì)胞的結(jié)合，但是每種細(xì)胞的生長(zhǎng)速度會(huì)不一樣，所以需要按照細(xì)胞的生長(zhǎng)特性調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間，細(xì)胞鋪滿(mǎn)孔底時(shí)劃痕的效果會(huì)比較好，建議是的鋪滿(mǎn)。
2. 用槍頭畫(huà)線時(shí)盡量垂直，以6孔板為例 ，一個(gè)孔可以畫(huà)6條線。
3. 畫(huà)線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細(xì)胞。
4. 注意培養(yǎng)方式一定要改成無(wú)血清或者低血清的培養(yǎng)基，因?yàn)椋簞澓酆笥脽o(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，意在說(shuō)明在監(jiān)測(cè)的 24 小時(shí)內(nèi)，劃痕的縮小是細(xì)胞 遷移作用的結(jié)果，所以要將細(xì)胞增殖造成細(xì)胞遷移的影響降到蕞低；但若細(xì)胞改成無(wú)血清培養(yǎng)后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%。
5. 放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)。可按0，10，12，15時(shí)間點(diǎn)取樣，拍照(具體時(shí)間依實(shí)驗(yàn)需要而定)。
6. 統(tǒng)計(jì)方法：使用Image J軟件打開(kāi)圖片后，抓取自己畫(huà)的線條，計(jì)算細(xì)胞間距離的平均值。
