探討ELISA、SPR、EMSA等分子生物學實驗特性
發布時間：2021-08-18瀏覽次數：1163返回列表
目前，針對分子生物學實驗有多種技術方法，那么我們該如何判斷選擇哪種方法適合呢？我們需要去了解實驗方法的特性。無非就是用某種特定的刺激物(如細胞活素)去刺激一些細胞或組織，讓它們high起來，然后分析細胞對這些外源刺激物的反應，檢測細胞內哪條信號通路被激活或失活，或者什么蛋白被分泌出來。每一種實驗方法都有它的特性，下面就以下幾種方法做介紹：
1、酶聯免疫吸附劑測定（ELISA）：
酶聯免疫吸附測定enzyme l
2、表面等離子體共振（SPR）：
表面等離子共振(Surface Plasmon Resonance，SPR)除了研究蛋白-蛋白相互作用(例如受體-配體相互作用)，還有可研究小分子-蛋白或細胞-蛋白的相互作用。這種方法不需要標記蛋白(熒光標記或同位素標記)，還可以實時定量分析這些相互作用的親和力、熱力學、動力學特性。SPR是分析動力學和親和力的金標準。
3、電泳遷移率實驗（EMSA）：
電泳遷移率實驗(Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA)初用于檢測DNA結合蛋白與相應的DNA序列結合的情況，可做定性和定量分析，包括細胞核中的轉錄因子(如NF-kB )的活性等等，現在也常用于研究RNA結合蛋白和相應的RNA序列相互作用。
這些分析用酶聯免疫吸附實驗(Eenzymel
4、聚合酶鏈式反應（PCR）：
PCR(Polymerase Chain Reaction)或Real Time PCR可以把特定的DNA序列大幅擴增，便于檢測活性基因的表達情況。而且PCR用途很廣。
5、免疫印跡實驗（WB）：
免疫印跡實驗(Western Blot，WB)可檢測信號通路中某種蛋白質的特性、表達和分布，分析容量大、敏感度高、特異性強。建立蛋白質的個人檔案。
但至于蛋白-蛋白相互作用則要用另一種復雜的方法，即免疫共沉淀法(Co-immunoprecipitation，Co-IP)，它接近細胞內的生理情況，是以成為經典方法。
