基因多態性對原發性肝癌細胞浸潤的實驗方法
發布時間：2018-07-24瀏覽次數：1487返回列表
1.1 研究對象
前瞻性收集 2017 年 1 月 -2017 年 12 月吉林大學一醫院收治的原發性肝癌患者臨床資料。納入標準 ： 原發性肝癌（確診依據為病理診斷） ； 有手術適應證，可行手術治療 ； 年齡 18 ～ 75 歲 ； 同意參與本研究，并簽署知情同意書。排除標準 ： 合并其他惡性腫瘤 ； 復發性肝癌 ； 肝、腎、心、腦、肺等重要臟器功能不全； 感染性疾病； 血液系統疾病； 凝血功能障礙；術前接受新輔助化療等特殊治療 ； 3 個月內曾使用免疫調節劑； 免疫功能不全 ； 遠處轉移，不宜行手術治療的晚期肝癌患者。研究期間共納入原發性肝癌患者109 例，根據CD44 基因 rs4756195 位點單核苷酸多態性，將患者分為 AA 組、AG 組和 GG 組，分別為 67、23 和 19 例。1.2 觀察指標
主要觀察指標為腫瘤組織中 CD4+ T 細胞、CD8 +T 細胞、Treg 細胞、Th17 細胞。次要觀察指標為白介素 -2 （interleukin-2, IL-2） 、 白介素 -10 （interleukin-10,IL-10） 、腫瘤生長因子 -β（tumor growth factor-β,TGF-β）和白介素 -17（interleukin-17, IL-17） 。
1.3 方法
1.3.1流式細胞術
術中留取原發性肝癌組織標本（距離肝癌邊緣 >1 cm 的肝癌組織） ，使用流式細胞儀（美國 Beckman coulter 公司 Epics XL 型） 檢測 CD4+ T、CD8+ T、Treg 及 Th17 細胞。
1.3.2免疫組織化學法
采用免疫組織化學法檢測IL-2、IL-10、TGF-β 和 IL-17，相關單克隆抗體均購自美國 Santa Cruz 公司，抗體比例 1 ∶ 80。陽性判定標準 ：根據染色強度和陽性細胞百分比計算，其中不著色、淺黃色、棕黃色、黃褐色分別為0、1、2 和 3 分， 陽性細胞數為 <10%、10% ～ <40%、40% ～ <70%、≥ 70% 分別計 0、1、2 和 3 分，兩者之和為總分， 總分≥ 2 分為陽性， <2 分為陰性。
