適合大規模應用的豬瘟抗體檢測方法——ELISA方法
發布時間：2019-08-16瀏覽次數：2476返回列表
豬瘟在我國屬重大動物疫病。我國對豬瘟防控主要采用豬瘟疫苗免疫的策略，而抗體檢測是免疫效果評價的主要手段。目前，動物衛生組織推薦的豬瘟抗體檢測方法是ELISA 檢測方法和熒光抗體中和試驗，而熒光抗體中和試驗對試驗條件和操作人員的要求很高，且耗時長，僅適合專業實驗室進行少量樣本檢測，不宜推廣應用。因此可以說，ELISA方法是目前上承認的惟一適合大規模應用的豬瘟抗體檢測方法。
在進行ELISA檢測方法評價時，重要的兩個指標就是敏感性和特異性，而二者又存在一定的矛盾性。當對一種檢測方法的敏感性要求較高時，勢必會損失一部分特異性；同樣，當特異性要求較高時，勢必會損失一部分敏感性。因此，對于一個好的檢測方法來說，一定要尋找敏感性和特異性佳的平衡點和結合點。目前，用于豬瘟抗體檢測的ELISA方法主要有阻斷ELISA和間接ELISA兩種原理。阻斷ELISA使用了單克隆抗體，因此檢測的特異性高；而間接ELISA則側重于敏感性。
阻斷ELISA 和間接ELISA 在實際應用過程中，均具有合理性。但是針對我國的大規模豬瘟強制免疫現狀，如何在不同的應用范圍選擇適合的試劑盒就成為一個重要問題。 因此，本文主要介紹間接ELISA試劑盒和進口阻斷ELISA試劑盒在臨床應用上的對比研究，幫助讀者在實際生產中選擇為合適的檢測試劑。
試劑盒研制原理的差異
阻斷試劑盒基于液相阻斷原理，反應孔的顏色深淺與血清中的抗體含量成反比。阻斷ELISA采用了單克隆抗體檢測，可大大提高檢測的特異性，但實際檢測的對象卻只是針對單一表位的抗體（檢測為特異性抗體）。因此，當陽性血清中針對該表位抗體豐度不高時，會導致檢測的敏感性降低（出現假陰性結果）。
間接試劑盒基于間接ELISA 原理，反應孔顏色深淺與結合在反應板中的特異性抗體的量成正比。由于間接ELISA檢測的是針對包被抗原蛋白的多克隆抗體（檢測為豬體內的總抗體），因此會提高檢測的敏感性。
兩種試劑盒與熒光抗體病毒中和試驗符合率分析
熒光抗體病毒中和試驗（FVNT）是OIE 推薦方法，為豬瘟抗體檢測的“金標準”。有臨床試驗表明對兩種ELISA抗體檢測試劑盒檢測結果存在差異的283 份血清樣本采用FVNT的方法進行了確認檢測，結果顯示，間接試劑盒與FVNT 的符合率為69.26%，阻斷試劑盒與FVNT 的符合率為28.62%。不符合樣本的確認結果表明，間接試劑盒能真實地反映疫苗免疫后的中和抗體水平，而阻斷試劑盒對陽性血清存在明顯的漏檢狀況。
對免疫豬血清抗體的動態監測
通過對免疫豬抗體增長趨勢的檢測結果看出，豬瘟抗體間接ELISA對抗體由陰轉陽的檢出時間為免疫后的12-15d，而阻斷ELISA試劑盒檢測表明在免疫后的15-28d陸續由陰性轉為陽性。由于間接ELISA 檢測的是針對E2蛋白的所有抗體，而阻斷ELISA檢測的是針對E2蛋白某一個表位的抗體，在免疫初期由于抗體豐度的不同，導致間接ELISA對陽性抗體的檢出要早于阻斷ELISA。說明間接ELISA敏感性高，適合免疫后的早期監測，疫苗效力監測和免疫程序的制定。
對不同抗體水平的豬血清進行有效的區分
豬瘟抗體間接ELISA試劑盒可以對不同抗體水平的豬血清進行有效的區分，可以從IE值上直觀的比較兩份血清抗體水平的高低。間接法試劑盒中所采用的標準陽性血清為反復免疫的豬瘟抗體強陽性血清，而待檢的免疫血清在免疫后213d達到高值時，仍不到陽性對照血清OD值的80%。因此說明，間接ELISA試劑盒能夠在寬的范圍內對抗體水平進行區分。而阻斷ELISA試劑盒采用的是阻斷ELISA原理，當抗體達到可以將包被的抗原全部封閉的水平后，就出現了檢測平臺期。因此，阻斷ELISA只能在一定范圍內對抗體水平的高低進行區分。
臨床應用
在進行田間大規模普查時，需要對某一地區，某一群體的整體免疫狀況進行分析，因此對檢測方法的敏感性要求較高，間接ELISA適合于我國豬場大規模豬瘟疫苗普免抗體水平的普查。針對種豬場豬瘟的凈化，需要對每頭動物的抗體水平進行檢測評價的同時，還要排除其他疫病陽性抗體的干擾，因此對檢測方法的特異性要求較高，熒光抗體病毒中和試驗為金標準。在實際應用過程中，一定要對試劑盒的質量進行嚴格的甄選，并且根據實際應用對象選擇適當的檢測方法。
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