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熒光探針PCR用基因擴(kuò)增儀的原理
發(fā)布時(shí)間：2013-12-30瀏覽次數(shù)：2119返回列表
基因擴(kuò)增技術(shù)-聚合酶鏈反應(yīng)又稱無(wú)細(xì)胞分子克隆系統(tǒng)或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增法，是基因擴(kuò)增技術(shù)的一次重大革新。
PCR擴(kuò)增DNA的原理是：先將含有所需擴(kuò)增分析序列的靶DNA雙鏈經(jīng)熱變性處理解開(kāi)為兩個(gè)寡聚核苷酸單鏈，然后加入一對(duì)根據(jù)已知DNA序列由人工合成的與所擴(kuò)增的DNA兩端鄰近序列互補(bǔ)的寡聚核苷酸片段作為引物，即左右引物。
擴(kuò)增過(guò)程中，單核苷酸的錯(cuò)誤參入程度很低、其錯(cuò)配率一般只有約萬(wàn)分之一，足可以提供特異性分析，選用各型病毒相對(duì)的特異寡核苷酸引物。
擴(kuò)增產(chǎn)物可直接供作序列分析和分子克隆，擺脫繁瑣的基因方法，可直接從RNA或染色體DNA中或部分DNA已降解的樣品中分離目的基因，省去常規(guī)方法中須行克隆后再作序列分析的冗繁程序。
PCR標(biāo)本的制備
在將Taq DNA聚合酶引入PCR反應(yīng)，并使之達(dá)到自動(dòng)化之后，許多PCR的失敗都?xì)w因于標(biāo)本的制備不當(dāng)。用于PCR的標(biāo)本必須經(jīng)適當(dāng)處理后才能使用，因?yàn)闃?biāo)本中的許多雜質(zhì)能抑制Taq DNA聚合酶的活性。
另外，處理標(biāo)本可使待擴(kuò)增DNA暴露，能與引物復(fù)性。關(guān)于PCR標(biāo)本制備各種專業(yè)書中介紹了許多，我們實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)操作復(fù)雜、不慎便容易造成污染，且不實(shí)用?，F(xiàn)介紹一種簡(jiǎn)單快速的處理方法即3%異硫氰酸胍和待檢標(biāo)本混合100℃，10min，離心取上清作為PCR模板即可。
