PCR基因擴增儀的工作原理

發布時間：2020-06-20瀏覽次數：1310返回列表

PCR技術的原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于靶序列兩端互補的寡核苷酸引物，由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成。

1. 模板DNA的變性

模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。

2. 模板DNA與引物的退火(復性)

模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈互補序列配對結合。

3. 引物的延伸

DNA模板-引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。

重復循環變性-退火-延伸三過程，就可獲得多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一輪循環需2~4分鐘，如此反復進行，每一輪循環所產生的DNA均能成為下一輪循環的模板，每一輪循環都使兩條人工合成的引物間的DNA特異區拷貝數擴增1倍，PCR產物以2的指數形式迅速擴增，經過25~30輪循環后(2~3小時)，理論上可使基因擴增109倍以上，實際上一般可達106~107倍。