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使用TSKgel UP-SW3000進行單克隆抗體分析
發布時間：2022-07-29瀏覽次數：1226返回列表
使用TSKgel UP-SW3000進行單克隆抗體分析
近年來，抗體藥物市場在逐步擴大，未來的幾年仍將持續發展。越來越多的抗體藥物將會應用到疾病的治療中。尺寸排阻色譜法（SEC）廣泛用于抗體中單體，二聚體，聚集體和片段等的分析和定量中。為實現高的分離度和快的分析時間，色譜柱生產廠家優化了填料顆粒化學和色譜柱填充方法,近年來,2μm和亞2μm粒徑SEC色譜柱相繼問世.
通過這種方法使得一些樣品的分析結果得到了改善，但由于一些新型抗體藥物具有高度的疏水性，抗體在色譜柱凝膠基質上的非特異性吸附使得抗體藥物的分析仍然具有一定的挑戰。在本應用指南中，使用TSKgel®UP-SW3000，2μm SEC色譜柱分析單克隆抗體（mAb），并在pH 6.7的磷酸鈉緩沖液中添加15％IPA。如圖所示，峰分離度和保留時間變化均不受影響。
HPLC實驗條件
色譜柱：TSKgel UP-SW3000，2μm，4.6 mm ID x 30 cm
儀 器：Chromeleon®（7.2版）運行的UltiMate®3000 UHPLC系統
流動相：100 mmol / L KH2PO4 / Na2HPO4中的15％IPA，pH 6.7，100 mmol / L Na2SO4、0.05％NaN3
流 速：0.30 mL / min
檢 測：紫外線@ 280 nm
溫 度：30?C
壓 力：22 MPa（大色譜柱壓力為34 MPa）
進樣量：5μL，4 mg / mL
樣 品：USP mAb標準品
結果與討論
將USP mAb標準品注射到TSKgel UP-SW3000 4.6 mm ID×30 cm色譜柱上，利用磷酸鈉緩沖液pH 6.7為流動相，樣品具有出色的重現性，如圖1所示。該圖顯示了以0.3 mL / min的流速連續進樣14針USP mAb標準樣品，單體，二聚體，聚集體和碎片峰的保留時間幾乎不變，每次進樣的峰寬和峰形非常一致。
