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TSKgel FcR-IIIA-NPR——高效篩選抗體ADCC活性色譜柱
發(fā)布時間：2021-10-27瀏覽次數(shù)：2011返回列表
TSKgel FcR-IIIA-NPR——高效篩選抗體ADCC活性色譜柱
在單克隆抗體藥物的初期研發(fā)階段中，通過對細胞株實施篩選，選出能產(chǎn)生滴度較高、ADCC活性較高的細胞株。此時常會用到的幾種評估方法是，通過生物檢定法測定ADCC活性；通過表面等離子共振法（SPR）測定人體IgG受體（FcγⅢa等）的親和力；通過LC/MS分析抗體酶切下來的糖鏈結構等。但這些方法都需要花費大量的時間和人力。
能夠把這些復雜的評估分析法由繁化簡，并快速完成分析的HPLC色譜柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR。
使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以直接分離抗體，無需對細胞培養(yǎng)液進行前處理。抗體主要可以分離出3個洗脫峰。已有研究表明，抗體糖鏈末端的半乳糖數(shù)量越多，在此色譜柱中的保留能力越強，而保留能力越強的洗脫峰，其ADCC活性就越高。
細胞培養(yǎng)液中單克隆抗體的分離
TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以用來測定和監(jiān)控細胞培養(yǎng)時抗體糖鏈的性狀變化。取不同培養(yǎng)天數(shù)的細胞培養(yǎng)液，使用Protein A填料對抗體樣品粗純后，再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱分析的結果如圖所示。
抗體細胞培養(yǎng)天數(shù)和產(chǎn)生抗體的變化
隨著培養(yǎng)天數(shù)的延長，抗體的3個洗脫峰會向前側的洗脫峰位移。雖然延長了細胞培養(yǎng)天數(shù)，抗體的產(chǎn)量增加，但是由于受到細胞外糖鏈修飾酶的影響，在色譜柱中的保留能力較高的抗體（多糖的末端半乳糖數(shù)量較多的抗體）的洗脫峰反而減少了。因此，可以推定產(chǎn)生的抗體的ADCC活性已經(jīng)降低。
TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途
①確認不同細胞株 (CHO細胞、HEK細胞等) 中抗體的性狀變化。
②確認多個細胞株篩選時抗體的性狀變化。
③確認當改變細胞培養(yǎng)基添加劑時抗體的性狀變化
④細胞培養(yǎng)過程中隨培養(yǎng)天數(shù)的變化導致抗體性狀變化的確認。
⑤細胞培養(yǎng)規(guī)模放大 (改培養(yǎng)方法) 時，確認抗體是否發(fā)生性狀變化。
