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谷丙轉(zhuǎn)氨酶 (ALT/GPT) 測試盒說明書
發(fā)布時間：2023-11-03瀏覽次數(shù)：841返回列表
谷丙轉(zhuǎn)氨酶 (ALT/GPT) 測試盒說明書
一、測定原理：
谷丙轉(zhuǎn)氨酶 (ALT) 在 37℃及 PH7.4 條件下，作用于及α-酮戊二酸組成的底物，生成丙酮酸及。反應 30min 后 (固定時間) 加入 肼 (DNPH) 鹽酸溶 液，既中止反應， 同時 DNPH 與酮酸中羰基加成，生成丙酮 酸苯腙。苯腙在堿性條件下呈紅棕色，于 505nm 比讀吸光度 并計算酶活力。
二、試劑的組成與配制：(96T)
試劑一:谷丙轉(zhuǎn)氨酶基質(zhì)液,5mL×1 瓶，4℃冰箱保存 6 個月; 試劑二肼液,5mL×1 瓶，4℃冰箱保存 6 個月; 試劑三:4mol/L 氫氧化鈉液,5mL×1 瓶，室溫密封保存 6 個月; 0.4mol/L 氫氧化鈉液的配制, 臨用時按 4mol/L 氫氧化鈉液:雙
蒸水=1 ∶9 的比例稀釋，需多少配多少，室溫密封保存。 試劑四:2
mol/mL 丙酮酸鈉標準液×1 支，4℃冰箱保存 6 個月; 試劑五:0. 1mol/L 磷酸鹽緩沖液×1 支，4℃冰箱保存 6 個月。
三、操作過程：
1 、樣本前處理:
①、血清 (漿) 及其它液體樣本待測：直接測定。
② 、動物組織樣本：準確稱取組織重量，按重量 (g) ：體積 (mL)=1:9 的比例，加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件 下機械勻漿，2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液待測。
③ 、培養(yǎng)細胞樣本前處理：將收集好的細胞用等滲緩沖液 (推 薦 0.1mol/L pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水) 清洗 1~
2 次;1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上清, 留細胞沉淀，加入勻 漿介質(zhì) (推薦加入 0.1mol/L pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液或生 理鹽水) ，冰水浴條件
1 、比色法中常用的有賴氏 (Reitman-Frankel) 法及金氏 (King) 法。賴氏法標準曲線所定單位數(shù)，是用實驗方法和卡門氏分 光 光度法 (速率法) 作對比測定求得的。 以卡門氏單位報 告結果，比較準確。
卡門氏單位定義：1mL 液體，反應液總容量 3mL ，波長 340nm， 1cm 光徑，25℃ ，1min 內(nèi)所生成的丙酮酸，使 NADH 氧化 成 NAD+而引起吸光度每下降 0.001 為一個單位 ( 1 卡門氏 單位=0.482 U/L ，25℃) 。
2 、一般血清標本內(nèi)源性酮酸很少，血清對照孔吸光度值接近試 劑空白孔 (以雙蒸水代替血清，其他和對照孔同樣操作) 。 所以，成批標本測定時，一般不需要每一標本都作本身血清 對照孔， 以試劑空白孔代替即可，但對脂血、黃疸或溶血血 清，每份標本應作對照孔。
3 、酶活力超過 150 卡門氏單位時，用生理鹽水稀釋血清后重測。
4 、應將一般血清的對照孔 (或稱標本空白孔) 的吸光度作為日 常質(zhì)控的指標之一;如相差大，可考慮α-酮戊二酸濃度、DNPH 濃度及儀器等原因引起。
5 、血清中ALT 在室溫 (25℃) 可保存 2 天，在 0~4℃可保存一 周，在-25℃可保存 1 個月。
谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒
