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古朵闡述：瓊脂糖凝膠電泳的制備過程
發布時間：2023-09-05瀏覽次數：891返回列表
古朵闡述：瓊脂糖凝膠電泳的制備過程
瓊脂糖是實驗室常用的試劑之一，但是瓊脂糖凝膠電泳的制備過程也不簡單，接下來古朵生物技術小編就為大家詳細介紹一下制備過程。
一、用稱量紙片電子天平取0.3g的瓊脂粉;
二、配30ML的1*10的TBST緩沖液與100ml的三角燒瓶里;
三、倒入瓊脂粉搖勻，并轉到微波爐中加熱溶解;
四、用手套取出到涼水稍稍晾涼至溫熱后(約60℃)，加入核酸酶(Eb替代物)2ul;要邊加邊搖勻，使之充分搖勻;
五、取電泳槽內的有機玻璃內槽(制膠槽)洗干凈,晾干，放入制膠玻璃板.取透明膠帶將玻璃板與內槽兩端邊緣封好，形成模子。
將內槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.將冷卻到65℃左右的瓊脂糖凝膠液混勻小心地倒入內槽玻璃板上，使膠液緩慢展開，直到整個玻璃板表面形成均勻膠層。
室溫下靜置直至凝膠凝固,垂直輕拔梳子，取下膠帶，將凝膠及內槽放入電泳槽中。
注意：制備過程中請戴好手套;梳齒處不可存在氣泡，液面應保持平整無波紋。
開始跑膠
一、膠凝后取膠放到電泳槽中，倒入電泳液至浸過凝膠。
二、從冰箱中取出MARK和loading buffer，加入6ULloading buffer到樣品中混勻;然后用加樣槍分別加到凝膠的大孔中(要緩慢加，不要穿破凝膠，后槍不要打盡以至于有空氣使樣品吹打出來);MARK加到小孔中的任一孔(記住位置)。
三、蓋上電泳槽，加樣后的凝膠板立即通電進行電泳，電壓60-100V，樣品由負極(黑色)向正極(紅色)方向移動，電壓升高，瓊脂糖凝膠的有效分離范圍降低，當溴酚藍移動到距離膠板下沿約1cm處時，停止電泳。
四、使用凝膠成像儀拍照，觀察條帶(mark或樣品是否有條帶顯示)。
觀察方法
電泳時間依據實驗的具體要求而定，在電泳中途可以使用紫外燈直接觀察，也可以根據指示劑確定條帶的遷移位置，各條區分開后電泳結束，取出凝膠直接檢測拍照。
拿到膠體條帶圖譜后，找到marker，根據marker就可以確定目標條帶了。
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