大鼠B因子(BF)elisa試劑盒使用說明

  Elisa kit規(guī)格：48孔配置/96孔配置

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液：1.5ml×1瓶

  酶標(biāo)試劑：3 ml×1瓶(48)/6 ml×1瓶(96)

  【大鼠B因子(BF) elisa試劑盒】本試劑僅供研究使用

  計(jì)算：

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

  試劑盒組成：

  封板膜:2片(48)/2片(96)

  說明書:1份

  密封袋:1個(gè)

  標(biāo)準(zhǔn)品： 2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

  酶標(biāo)包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存

  樣品稀釋液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

  顯色劑A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

  顯色劑B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

  終止液: 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

  濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存

  實(shí)驗(yàn)原理：

  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠B因子(BF) 水平。用純化的大鼠B因子(BF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入B因子(BF) ，再與HRP標(biāo)記的B因子(BF)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的B因子(BF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠B因子(BF) 濃度。

  目的：本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中B因子(BF) 的含量。

  服務(wù)承諾：

  供貨期：款到發(fā)貨。

  工作時(shí)間內(nèi)免費(fèi)的技術(shù)咨詢和指導(dǎo) 。請(qǐng)來(lái)電咨詢

  為客戶提供來(lái)樣檢測(cè)服務(wù)，大限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性(免費(fèi)代測(cè))。

  保存條件及有效期：

  試劑盒保存：2-8℃| 有效期：6個(gè)月

  【大鼠B因子(BF) elisa試劑盒】樣本處理及要求：

  1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

  2 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

  3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

  4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

  5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

  6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

  7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  操作步驟：

  1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻;然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L，600ng/L，300ng/L， 150ng/L)。

  2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

  3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

  4. 配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

  5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

  6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

  7. 溫育：操作同3。

  8. 洗滌：操作同5。

  9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

  10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

  【大鼠B因子(BF) elisa試劑盒】注意事項(xiàng)：

  1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

  3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

  4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

  6. 底物請(qǐng)避光保存。

  7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

  9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

  10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

  試劑盒性能：

  1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

  2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%

  檢測(cè)范圍：

  0.2IU/L - 6IU/L

  ELISA試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。