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古朵生物：細胞爬片HE染色方法
發(fā)布時間：2023-06-19瀏覽次數(shù)：856返回列表
細胞爬片HE染色方法
一、實驗原理：
蘇木素(Hematoxylin)-伊紅(Eosin)染色法，簡稱HE染色法。
HE染色法采用兩種染料即堿性染料蘇木素和酸性染料伊紅分別于細胞核和細胞質(zhì)發(fā)生作用，使細胞的微細結(jié)構(gòu)通過顏色而改變它的折光率，從而在光鏡下能清晰地呈現(xiàn)出細胞圖像。該染色過程既有化學(xué)反應(yīng)，又有物理作用參與。從化學(xué)反應(yīng)看，組織細胞內(nèi)含有酸性物質(zhì)和堿性物質(zhì)，細胞的酸性物質(zhì)與堿性染料的陽離子結(jié)合，而細胞核的堿性物質(zhì)與酸性染料的陰離子結(jié)合，使其中酸性細胞核被堿性的蘇木素染成藍色，而堿性的胞漿被酸性染料伊紅染成紅色。其結(jié)果胞核呈藍色，胞漿呈紅色。從物理現(xiàn)象看，主要有吸附、吸收之說。HE染色提供良好的核漿對比染色，是細胞化學(xué)染色zui常用的一種方法。
二、實驗用品：
(1)固定液：常用95%乙醇和冰丙酮
(2)蘇木精染液：稱取蘇木精粉0.5g，銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入干油30ml和冰醋酸2ml，混合均勻，濾紙過濾，備用。
(3)伊紅染液：稱取0.5g水溶性伊紅染液，溶于100ml蒸餾水中。
(4)*乙醇溶液：用75%乙醇配制1%鹽酸。
(5)系列濃度的乙醇、二甲苯、中性樹膠。
(6)培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、*、蓋玻片、載玻片、顯微鏡。
三、實驗步驟：
(1)樣品制備：對于貼壁生長細胞，*消化，調(diào)整細胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上(置于6孔板中)，培養(yǎng)相應(yīng)時間后，取出細胞爬片，用PBS洗滌3次。
(2)樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。
(3)染核：蘇木素染液染色2-3min，自來水洗滌。
(4)分色：鏡下觀察，若細胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來水洗滌。
(5)染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。 吹干或自然晾干細胞爬片后，中性樹膠封片。 若細胞用4%多聚甲醛固定，則染色時間相應(yīng)延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。
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