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問題大全：ELISA實驗所用試劑解析大全
發布時間：2023-05-24瀏覽次數：792返回列表
問題大全：ELISA實驗所用試劑解析大全
在ELISA實驗中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
(2)酶標記的抗原或抗體(結合物);
(3)酶的底物;
(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標準品和控制血清(定量測定中);
(5)酶聯物(結合物)及標本的稀釋液;
(6)洗滌液;
(7)酶反應終止液。
1.免疫吸附劑
已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個月以上。有些不完整的試盒，僅供應包被用抗原或抗體，檢測人員需自行包被。以下簡述固相載體和包被過程。
2.固相載體
固相載體在ELISA測定過程中作為吸附劑和容器，不參與化學反應。可作ELISA中載體的材料很多，常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的性能，抗體或蛋白質抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學活性，加之它的價格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式。
ELISA載體的形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板為常用，專用于EILSA的產品稱為ELISA板，上標準的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標本的檢測，有制成8聯孔條或12聯孔條的，放入座架后，大小與標準ELISA板相同。ELISA板的特點是可以同時進行大量標本的檢測，并可在特制的比色計上迅速讀出結果。現在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對操作的標準化極為有利。聚苯乙烯經射線照射后，其吸附性能特別是對免疫球蛋白的吸附性能增加，應用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測抗體時空白值較大。
良好的ELISA板應該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別，各種產品的質量差異很大，因此，每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔，洗滌后每孔內加入適當稀釋度的酶標抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應后，分別測每孔溶液的吸光度。控制反應條件，使各孔讀數在吸光度0.8左右。計算全部讀數的平均值。所有單個讀數與全部讀數的均數之差，應小于10%。
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