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培養的NK細胞不滿意，哪步出了錯？
發布時間：2022-05-05瀏覽次數：1139返回列表
對培養的NK細胞不滿意，是培養基的問題，還是試劑盒的問題？關于NK細胞培養的問題，不能只認為培養基不好或試劑盒不好，很多客戶在培養過程中遇到接種密度的問題、補液程序的問題、血漿問題以及樣本的問題，所以影響NK細胞培養效果的因素非常之多，下面古朵生物為大家進行排查。
首先確認樣本的狀態，理論上來講外周血樣本應在抽取的6個小時內進行細胞分離，這個時段細胞是處于好的狀態，所以培養前請確認樣本是否新鮮，以及血液是否出現溶血現象
血液樣本保存時間過長，會導致單核細胞無法成功誘導激活。
血液如在運送過程中溶血，則可能導致血漿分離出現問題，無法后期培養添加。
如用凍存的單個核細胞復蘇培養，請確認復蘇單個核細胞的活率及狀態。
2、接種密度問題
請確保接種的密度在1.5-2x106cells/m L，過低密度會導致細胞前期增殖緩慢，無法達到補液要求。
3、血漿的處理及添加方式
（1）血漿必須要56℃滅活30min，除去多余的纖維蛋白，如有可能冷凍后離心，保證細胞培養時添加的血漿不會有纖維蛋白析出粘連正常細胞。
（2）如有可能有多剩余的血漿，可在后期補入，對于有些狀態較差的樣本會有好的培養效果。
4、補液原則問題
NK培養受樣本差異性影響會很大，所以沒有一個固定的補液程序可以指導各種不同的樣本。
有的樣本激活迅速，生長快速，補液就相對容易，也好擴增，可有的樣本前期就長的較慢，如遇到腫瘤患者晚期年老的病人，是難上加難，所以針對不同的樣本，我們應該有不同的應對原則：
（1）首先7天以后的補液原則是補液后細胞密度應在0.5-0.8x106cells/m L，如密度達不到，請延遲一天后再進行補液，否則當你細胞補液密度過低時，好的樣本可以長起來，那差的樣本就會逐漸凋亡，無法繼續培養。
（2）對于差的樣本，適當增加血漿的添加次數，可以得到好的效果，比如標準程序需要加3-4次血漿，那么有可能的話你可以加到5次。
5、操作原因
（1）補液培養基的溫度
培養基補液前應提前預溫，過冷的培養基會導致細胞應激反應，出現絮狀物；
（2）培養箱環境的劇烈變化
培養箱異常，溫度及二氧化碳濃度變化較大會導致細胞死亡，出現絮狀物；
（3）細菌、真菌、支原體污染
受到細菌、真菌、支原體污染的細胞生長非常緩慢，甚至不生長；
（4）因子試劑盒經過了反復的凍融
反復凍融會大大降低因子的活性，激活、誘導、擴增等環節都會出現問題，達不到優的效果。
