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你的實(shí)驗(yàn)室做常規(guī)支原體檢測(cè)了嗎
發(fā)布時(shí)間：2021-12-02瀏覽次數(shù)：1084返回列表
全球平均有約15~35%細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室發(fā)生支原體污染（65~80%嚴(yán)重污染），超過一半實(shí)驗(yàn)室有兩種支原體污染；而全球各地的細(xì)胞庫(kù)中，也有發(fā)現(xiàn)5~35%不等的支原體感染率，日本甚至高達(dá)60%。但！全球目前有在做常規(guī)支原體監(jiān)控的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室卻不到50%！
支原體為細(xì)菌的一類，早在1898年由法國(guó)
E. Nocard 及 E.R.Roux 從肺疫牛只中分離出來，1956年才正式命名為支原體
(Mycoplasma)；支原體大小介于細(xì)菌與病毒之間
(直徑介于0.15-0.3?m)，為目前發(fā)現(xiàn)小簡(jiǎn)單的原核微生物，可見的胞器是核糖體，沒有細(xì)胞壁，只有三層結(jié)構(gòu)的細(xì)胞膜 ，所以呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀，分枝狀等多種態(tài) 。
大多支原體基因組只有0.58－1.38百萬堿基，這使得它的生物合成能力薄弱，必須利用本身細(xì)胞膜表面高密度的黏附素附著于宿主細(xì)胞表面，并交換宿主的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜成分，來獲取增殖需要的物質(zhì)。但由于支原體生長(zhǎng)條件復(fù)雜，使得菌體培養(yǎng)困難重重，導(dǎo)致過去支原體一直不受關(guān)注；近幾年，拜分子生物學(xué)與基因組學(xué)的進(jìn)步所賜，基因構(gòu)造簡(jiǎn)單的支原體已引起了較為廣大注意。
實(shí)驗(yàn)室污染種類
至今，共有超過180種支原體被發(fā)現(xiàn)，有超過20種能感染體外培養(yǎng)的細(xì)胞，而目前實(shí)驗(yàn)室常見(95% 以上)的支原體則來自其中6種：
源自于實(shí)驗(yàn)人員鼻腔、口腔，并經(jīng)由飛沫傳至培養(yǎng)細(xì)胞中的口腔支原體（M.orale）、豬鼻支原體（M.fermentans）及人型支原體（M.hominis），居于首位（占總體的50%以上）。
其次則為大多來自牛血清的精氨酸支原體（M. Arginini）、萊氏無膽甾支原體（A. Laidlawii）、及來自豬源胰酶的豬鼻支原體（M. Hyorhinis）。
PS：BI胰酶經(jīng)過輻照，不含活的支原體。
既然支原體是細(xì)菌的一種，抗生素一加不就好了嗎?為什么可以搞到全球這么多細(xì)胞庫(kù)污染?
1.支原體體積非常小, 極易通過0.22um濾膜, 且一般光學(xué)顯微鏡無法觀察到。
2.支原體能附著并存活在器物表面(操作臺(tái), 培養(yǎng)箱,顯微鏡等), 提高操作污染概率。
3.支原體生長(zhǎng)緩慢，通常不破壞宿主細(xì)胞但默默改變了細(xì)胞生長(zhǎng)代謝，且對(duì)傳統(tǒng)抗生素具抗性，因?yàn)榭股卮蠖嗥茐募?xì)菌細(xì)胞壁, 而支原體恰恰沒有細(xì)胞壁。
4.支原體污染初期, 培養(yǎng)基不變色, 細(xì)胞形態(tài)正常，但等大量污染時(shí), 為時(shí)已晚, 耗時(shí)又耗力。
目前檢測(cè)方法可大致分成四種：
1.微生物培養(yǎng)法
將樣品培養(yǎng)在特殊瓊脂培養(yǎng)基上，在37?C有氧環(huán)境中孵育2周，陽性培養(yǎng)基上會(huì)長(zhǎng)出100~400um大小的“煎蛋狀”菌落。
2.DNA螢光染色法
支原體DNA中A-T含量占多數(shù)（55～80%），容易被Hoechst 33258此熒光劑染上，被支原體污染之細(xì)胞經(jīng)染色后，在細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一之螢光小點(diǎn)。
3.ELISA法
將支原體16S核糖體RNA標(biāo)上標(biāo)簽，然后用特定抗體預(yù)包被過的微孔板對(duì)標(biāo)簽進(jìn)行捕獲，再加入顯色用的抗體及底物，后通過比色法得出檢測(cè)結(jié)果。
4.PCR法
原理為擴(kuò)增支原體16S核糖體RNA的基因，能檢測(cè)多達(dá)19種支原體，操作快速、準(zhǔn)確性高
