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影響重組蛋白純化的因素有哪些？
發布時間：2021-09-07瀏覽次數：1089返回列表
隨著分子生物學技術的發展，以蛋白質的結構和功能為基礎來認識生命現象，已經成為當代生物醫藥研發的關注點之一。為了研究蛋白質，首先需要進行蛋白分離和重組蛋白純化，來得到高度純化并且具有生物活性的蛋白質。由于每一種蛋白的性質都有不同，所以沒有一種通用的蛋白純化方法，但是總的來說，一般影響重組蛋白純化的因素主要有以下幾種：
1、蛋白的屬性
在進行重組蛋白純化時，需要盡可能多的了解蛋白的屬性。如蛋白的化學性質，是否容易被蛋白酶降解，是否會和一些金屬離子、化學成分發生反應。蛋白的物理性質，是否對溫度敏感等。還有目的蛋白表達的定位，目的蛋白表達在胞內、細胞內膜、周質空間還是胞外等。
2、細胞內形成的區域與形式
細胞內區域化指的是模型細胞器對細胞的分割作用。內膜系統在細胞內形成一個個彼此隔離、相互的功能性結構區域，稱為細胞內房室化或區域化。細胞內區域化可以擴大細胞內的表面積，為提高細胞代謝功能奠定基礎，還可以形成細胞內不同的特殊微環境，有效提高了細胞新陳代謝的質量和效率。細胞內區域化還形成了一個嚴密而完善的細胞內體系。
3、蛋白表達系統的選擇
一般來說蛋白表達的量依賴于所選擇的蛋白表達系統。如對宿主細胞具有毒性，需要選擇抗毒性的表達系統。而且不同表達系統，如大腸桿菌表達系統、酵母表達系統、CHO細胞表達系統等和培養方法都顯著影響下游的處理過程。
4、菌株的背景
在重組蛋白純化的研究中，尤其是大腸桿菌表達純化時，需要注意宿主菌的選擇。多數人會直接選擇自己實驗室曾經用過的表達菌株，或者是載體配套的菌株，而不去追究原因，即使表達結果不佳，大多在表達條件和載體上找原因，也不會考究菌株的選擇是否適合。菌株的背景很重要，如菌株內源的蛋白酶過多，可能會造成外源表達產物的不穩定，所以一些蛋白酶缺陷型菌株往往成為理想的起始表達菌株。在決定是否使用何種菌株時，還需要注意不同菌株有時已經攜帶某個質?；蛘咭呀浘哂心撤N抗生素抗性，要注意自己的表達質粒是否能與之兼容。
而且為了得到正確折疊的目的蛋白，在誘導方式的選擇上，需要考慮表達菌株的一些情況。如表達菌種的生長情況，菌種是否健壯、是否是單克隆菌種、菌體的濃度是否適合誘導。生長狀態不好的表達菌，一方面會造成目的蛋白的錯誤折疊，造成蛋白大小、形態等發生改變，另一方面會因為IPTG的加入，導致菌體死亡或者降解。
5、表達蛋白的應用
蛋白表達、分離、純化可以探索和研究基因的功能以及基因表達調控的機理、供作結構與功能的研究和作為催化劑、營養劑等。選擇表達載體時，要根據所表達蛋白的終應用考慮。如為方便純化，可選擇融合表達；如為獲得天然蛋白，可選擇非融合表達。
培養條件的選擇也很重要，在實際的操作中，需要根據實際情況先小量摸索蛋白純化條件，待佳條件確定，可以按照比例放大來純化目的蛋白
