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穩(wěn)定細胞株篩選的三種方法淺析
發(fā)布時間：2021-06-15瀏覽次數(shù)：1075返回列表
業(yè)內周知，混合穩(wěn)定細胞株具有許多不同的穩(wěn)定細胞株。因為穩(wěn)定化的整合過程常常與失活的宿主內源基因的插入同時進行，穩(wěn)定化的混合細胞株或比較多個單克隆穩(wěn)定化的細胞株是實驗準確數(shù)據(jù)的基礎。由此，我們淺析常見的3種穩(wěn)定細胞株篩選的發(fā)展情況。
其一、96孔單克隆稀釋法篩選穩(wěn)定細胞株
96孔單克隆稀釋法可用于低整合率的轉染法，或用于穩(wěn)定懸浮細胞系的單克隆細胞系和篩選實驗。該方法的優(yōu)點在于理論上可得到非常均勻的單克隆抗體，且能穩(wěn)定篩選細胞懸液，是目前篩選穩(wěn)定且高產率細胞株的理想方法。其缺點是工作量較大，需要大量勞動力來不斷的分板、循環(huán)篩選穩(wěn)定細胞株，已達到篩選高產率的穩(wěn)定性單克隆細胞的目的。
其二、單克隆環(huán)法篩選穩(wěn)定細胞株
單克隆環(huán)法主要用于整合率低的轉染法以及獲得單克隆細胞株。單克隆環(huán)法具有工作量小的優(yōu)點，只要把轉染體細胞按一定的細胞密度放入新的培養(yǎng)皿，用合適的藥物篩選并在培養(yǎng)皿中進行擴增，適合少量勞動力作業(yè)，其劣勢可能難以獲得高產率的穩(wěn)定細胞株。
其三、逆轉錄病毒的混合克隆技術篩選穩(wěn)定細胞株
此法可用于制備穩(wěn)定混合細胞株，其優(yōu)點在于能在短時間內得到穩(wěn)定的細胞株，且能在任何時候將細胞稀釋成新的培養(yǎng)皿，傾向于整合靠近轉錄始端的位點的基因，容易激活下游基因，但同時這些整合到轉錄活性基因的基因很容易導致整合部位基因的插入失效，影響到克隆的純度。高等細胞株中存在非整合細胞，這種混合細胞內的細胞穩(wěn)定結合，不會失去生長的優(yōu)勢
