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細胞株開發(fā)的那些事兒
發(fā)布時間：2021-06-02瀏覽次數：888返回列表
工程細胞株開發(fā)涉及細胞培養(yǎng)及轉染，單細胞克隆及單克隆源性驗證，蛋白表達及結構特征篩選及鑒定，蕞終獲得優(yōu)-質的細胞株。
穩(wěn)定細胞株廣泛用于許多重要的應用，包括生物制品（如重組蛋白和單克隆抗體）生產、藥物篩選和基因功能研究。開發(fā)穩(wěn)定細胞株的過程通常始于將所需的質粒轉染至選定的宿主細胞，一般是 CHO 或 HEK 293 細胞。轉染后，研究人員隨后篩選和定量分析高表達的細胞克隆。
一旦檢測到這些高產細胞株，便進一步對這些細胞和其產生的蛋白質進行驗證。傳統(tǒng)上用于細胞株開發(fā)的手動篩選方法耗時且需要大量勞力，因此對于此類工作，存在對高通量、自動化解決方案的巨大需求。
細胞培養(yǎng)、轉染及培養(yǎng)基優(yōu)化
細胞培養(yǎng)是細胞株開發(fā)的基礎，無論是細胞轉染，培養(yǎng)基優(yōu)化，還是抗體表達檢測等實驗都在細胞培養(yǎng)的基礎上完成。細胞培養(yǎng)是一個長流程，精細，耗費時間和人力的流程，定期的細胞計數接種，細胞換液，細胞轉染等繁瑣的實驗對工作人員的挑戰(zhàn)極大，且在高通量的人工操作中易帶入污染而導致細胞培養(yǎng)及篩選的失敗。高通量、標準化、自動化的細胞培養(yǎng)能幫助我們在獲得geng準-確的結果的同時加速細胞株開發(fā)進度。
01、透射光細胞計數（無標記計數法）
透射光分割（分析）算法提高了不同細胞類型計數的準-確性，通常用于對未染色的活細胞或固定細胞進行成像。另外還有使用熒光方法檢測細胞核或細胞體的標準細胞計數方法。
02、圖像細胞計數法
圖像細胞計數法是一種將低倍率顯微鏡與成像和分析工具相結合的細胞計數技術。圖像細胞計數法有助于在單次檢測中提供關于大量細胞的細胞特性信息。圖像細胞計數法可用于無標記或熒光標記細胞，可對一個細胞群多次執(zhí)行，以隨時提供關于細胞動力學的信息。
03、活細胞成像
活細胞成像是通過顯微觀察研究活細胞的細胞結構和功能。它可以實時顯示和定量細胞的動態(tài)變化過程?；罴毎上癜喾N方向和生物應用 — 無論是對活細胞進行長-期動力學檢測，還是進行熒光標記。
04、如何計算轉染效率
在使用轉染的細胞株進行特定檢測前，測量轉染效率可為研究人員提供基因編輯產率的早期指示。使用透射光或能體現轉染的熒光通道均可獲得高質量圖像。圖像分析軟件可識別每個細胞并進行計數，判斷細胞是否為 GFP 陽性。然后，可以根據比值來計算轉染效率。
05、支原體檢測
支原體是蕞小且蕞簡單的原核生物，也是細胞培養(yǎng)物中常見的污染物。支原體污染的征兆包括增殖率降低以及基因表達等細胞反應變化。
細胞株鑒定
工程細胞株開發(fā)的主要目的是通過高通量篩選手段獲得數株高產穩(wěn)定表達的細胞株，為后續(xù)的工藝開發(fā)及優(yōu)化提供基礎。細胞株鑒定是對細胞株的表達量，表達抗體的生物活性、糖型結構等多種指標進行高通量篩選，通過綜合評估及分析篩選出候選細胞株。
細胞株鑒定的方法決定了細胞株開發(fā)的效率和效果，穩(wěn)定標準的篩選方法讓我們能獲得geng準-確的實驗結果，其決定了篩選的效果，而高通量快速的檢測手段決定了篩選的效率，讓我們geng快的篩選到目的細胞株
