當前位置：給覽網 » 公司 » 上海古朵生物科技有限公司
在線溝通：
公司名稱：上海古朵生物科技有限公司
聯系人：洛辰
電話：18321664727
手機：13621980056
郵件：2712232205@qq.com
地址：上海市嘉定區曹安公路5588號
慢病毒RNAi干擾實驗原理
發布時間：2021-03-12瀏覽次數：1054返回列表
（1）原理
慢病毒是逆轉錄病毒的一種，具有逆轉錄病毒的基本結構，但也有不同于逆轉錄病毒的組份和特性，作為基因治療載體發展起來，z近已用于轉基因動物制備。利用慢病毒構建的shRNA/miRNA載體，與化學合成的siRNA和基于瞬時表達載體構建的shRNA相比。
一方面可以擴增替代瞬時表達載體使用，另一方面，lentivirus－shRNA/miRNA克隆經過慢病毒包裝系統包裝后，可用于感染依靠傳統轉染試劑難于轉染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞和處于非分裂狀態的細胞，并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組，進行長時間的穩定表達。
（2）服務流程
1）含目的基因的慢病毒RNAi干擾載體的構建和純化提?。?br />
2）慢病毒干擾載體、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四質粒共轉染293T細胞；
3）培養48~72h，收集培養上清；
4）病毒的純化和濃縮（超離和/或超濾）；
5）滴度測定、目的基因檢定
6）將制得的慢病毒液轉導客戶的靶細胞，篩選混合穩定細胞株，并檢測靶基因的表達。
客戶提供
1）表達miRNA/shRNA的質粒（提供測序圖譜）或所要Knockdown的靶基因的名稱、序列；
2）所需要的病毒滴度及總量，病毒是否需要純化
3）若需要檢測靶基因的表達變化，如需要請提供相應的抗體
我們提供
1）提供重組后的慢病毒載體質粒
2）提供已測定好滴度、可以直接進行后續分析的慢病毒儲存液
