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被污染的細胞：我覺得還可以搶救一下
發布時間：2021-02-25瀏覽次數：934返回列表
有人說，養細胞像養孩子，要小心翼翼地伺候。其實不然，養細胞像養祖宗才對。孩子仍可罵可教育，但如果你對細胞粗暴一點，他會分分鐘不開心，讓你難堪。也有人說，沒有遭受過污染的人一定沒有養過多少細胞，但遇到污染不能妥善處理的也肯定不是“老司機”。
一、常見污染的分類
常見的細胞污染分為以下幾類：1），細菌污染：2）真菌污染：3），霉菌污染；4），支原體污染。
芽孢桿菌、葡萄球菌是細菌污染的主要菌屬，污染的主要特征為培養基變黃、渾濁，低倍鏡下呈沙粒狀布滿細胞間隙或培養基，高倍鏡下可見桿狀或球狀的細菌在培養基中游動（與細胞碎片的布朗運動明顯不同），有同學戲稱為“群魔亂舞”。需注意的是，在污染初期，細菌常成群存在，不一定會有明顯的運動，此時需引起警惕。
1. 細菌污染
常見的真菌污染是白色念珠菌污染，污染后培養基無明顯渾濁和變色，鏡下可見排列成串珠狀的球形真菌，污染嚴重時可見念珠菌連成片狀或團狀。真菌的運動能力較弱，鏡下一般看不到運動。
2. 念珠菌污染
霉菌污染時培養基一般也不變渾濁，顏色變化也不明顯，但肉眼可見漂浮的白色菌落，顯微鏡下可看到樹枝狀的菌絲。
3. 霉菌污染
支原體在鏡下無法看到，因而支原體污染時只能看到細胞狀態明顯變差卻沒有其他微生物污染的跡象，此時可通過PCR檢測確定。
二、細胞污染的處理
應對細胞污染的zui好對策是預防！預防！再預防！養細胞要勤快，平時所用到的耗材、器皿等要及時高壓滅菌，滅菌后超過一周未使用也應重新滅菌。配制的完全培養基、胰酶、PBS等zui好在一周內用完。同時，也應每天查看一下細胞狀態。在細胞房內應盡量少地走動，盡量少地說話，若咳嗽或噴嚏時務必背向超凈臺。
細胞污染后zui好的處理方式是丟棄。當個別細胞十分珍貴無法丟棄時可盡力“急救”一下。
那么如何急救呢？
1，判斷污染源。一旦發現細胞有污染的跡象或已污染，立即判斷可能的污染源：有無操作不當？培養基、胰酶、PBS等顏色、澄清度是否正常？
2，及時處理。若確定現有的培養基、胰酶、PBS可用，則繼續使用；若無法確定則新配完全培養基、PBS、胰酶，原有的液體在確定是否污染后再做處理。
現以貼壁細胞為例向大家介紹下細菌污染時如何“急救”：
1），立即棄去培養容器內的培養基，以PBS潤洗2~3次，加入胰酶處理至細胞形態略有改變但未脫離容器時棄去胰酶，加入PBS輕輕潤洗1遍；
2），加入20×雙抗，浸泡細胞3~5min，棄去雙抗；
3），加入新鮮的完全培養基（含10×雙抗）培養12 h；
4），12 h棄去培養基以PBS潤洗2~3遍后加入完全培養基（含10×雙抗）；
5），傳代時以較小轉速離心（如平時以1000 r/min離心，則可降為800~900 r/min離心），仍以含10×雙抗的培養基培養；
6），若第二代后鏡下找不到細菌，則第三代起可正常培養。正常培養48 h后無反彈則可認為污染已清除。
若為霉菌污染，在以PBS潤洗2~3遍后換液，無需加入高濃度雙抗。培養48 h后污染未再次出現即可。
若為真菌污染，在PBS潤洗、換液后可加入兩性霉素B（兩性霉素B有細胞毒性，不推薦使用），也可加入300μg/mL氟康唑培養，污染控制后改用150 μg/mL培養2~3代。
若懷疑支原體污染，則可進行PCR檢測或直接使用支原體清除試劑（如：某恒生物）。也可購買環丙沙星注射液，于超凈臺內打開直接添加到培養基中，以20μg/mL濃度 2代后改用10 μg/mL濃度持續培養約2
